雏鸡冷应激前后血清中差异蛋白质组学研究-动物营养学报.pdfVIP

动物营养学报２０１７，２９（５）：１５６７⁃１５７３ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１７．０５．０１５ 雏鸡冷应激前后血清中差异蛋白质组学研究 杨玉英　 刘　 鹏　 贺　 军　 刘　 洋　 姚睿智　 史宏昭　 甄　 莉　 唐德江　 李士泽∗ （黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 １６３３１９） 摘　 要： 本试验旨在比较分析雏鸡冷应激前后血清中蛋白质的表达差异，并对重点差异蛋白质 进行鉴定。 将３０ 只雏鸡随机分为３ 组，分别为冷应激组、冷适应组和常温对照组，收集各组雏 鸡的血液制备血清后进行双向凝胶电泳（２⁃ＤＥ），以获得血清蛋白质表达的２⁃ＤＥ 图谱，对２⁃ＤＥ 图谱进行差异分析（利用ＰＤＱｕｅｓｔ ８．０ 软件），随后采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 （ＭＡＬＤＩ⁃ＴＯＦ⁃ＭＳ）技术对差异表达蛋白质进行鉴定，并利用蛋白质印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）方法进 行验证。 结果显示：通过２⁃ＤＥ 对常温对照组、冷应激组和冷适应组雏鸡血清进行分析，得到了 比较完整的差异蛋白质数据，共找到差异蛋白质点２３ 个。 采用ＭＡＬＤＩ⁃ＴＯＦ⁃ＭＳ技术分析其中 几个重复性好且较为明显的蛋白质点，成功鉴定出４ 个差异蛋白质，其中２ 个为果糖二磷酸醛 缩酶Ｃ（ＡＬＤＯＣ），是参与葡萄糖、能量代谢通路供能的相关蛋白；随后，对差异蛋白质ＡＬＤＯＣ 进行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ验证，所得结果与２⁃ＤＥ 的结果相一致。 结果表明，雏鸡冷应激前后血清中蛋 白质的表达具有明显的差异，这些蛋白质的表达差异可能与冷应激有关。 关键词： 双向电泳；冷应激；蛋白质组；蛋白质表达差异；差异蛋白质点 中图分类号：Ｓ８５８．３１　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１７）０５⁃１５６７⁃０７ 　 　 应激（ｓｔｒｅｓｓ）是机体出现的全身性的非特异性 是蛋白质组学研究中最为经典和基本的研究方 适应反应，当动物机体平衡受到威胁时所发生的 法，可以将同种生物不同状态下的生物样本进行 一系列生理反应。 应激原是指能引起全身性适应 比较，监测蛋白质表达的变化，因此被广泛应用于 － ［４ ９］ 症的条件或事物的总称。 导致应激的因素是多种 差异表达蛋白质的检测和疾病的诊断等方面 。 多样的，在冬天，尤其是北方，寒冷的气候条件是 大量研究表明，动物长期处于寒冷环境下会导致 导致动物产生应激反应最为常见的因素，对畜禽 机体内环境稳定性发生改变，从而产生一系列异 的生产性能以及抗病能力有着严重的影响，极大 常的生理反应，增加机体产热，以应对寒冷刺激的 ［１０］ 地制约了畜牧行业的发展。 影响 。 血清中丰富的蛋白质可以反映出动物机 　 　 蛋白质组（ｐｒｏｔｅｏｍｅ）指一个基因组、细胞、组 体的生理环境，可通过分析其表达的差异，来判断 织所表达的所有蛋白质，最早由Ｍａｒｃ Ｗｉｌｋｉｎｓ 和 动物机体的生理状态，并将其作为疾病诊断的标 Ｋｅｉｔｈ Ｗｉｌｌｉａｍｓ在 １９９４ 年的一次双向电泳会议上 志蛋白质。 本试验拟利用高通量的蛋白质组学技 ［１］ 术对雏鸡冷应激前后血清中蛋白质的表达差异进 首次提出 。 蛋白质组学（ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ）是从蛋白 质水平来分析蛋白质类型、数量、空间结构以及相