提高大肠杆菌可溶性重组蛋白表达产率的研究进展.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（５）：１１８１２４ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 提高大肠杆菌可溶性重组蛋白表达产率的研究进展 １ ２ ２ １ ２ １ 张宇萌 　童　梅 　陆小冬 　米　月 　徐　晨 　姚文兵 （１中国药科大学生命科学与技术学院　南京　２１０００９） （２北京三元基因药业股份有限公司　北京市长效干扰素工程技术研究中心　北京　１０２６００） 摘要　大肠杆菌表达重组蛋白相比真核细胞具有成本低廉、大规模发酵容易、条件易于自动化控 制等优点，通过大肠杆菌表达重组蛋白是一种高效、经济的途径，重组蛋白表达量可达到大肠杆 菌总蛋白质量的５０％。具有正常生化活性的重组蛋白通常为可溶性形式，因而对于以得到活性 产物（如抗体、酶等）为目的的研究，通常采用可溶性表达途径。目前已有多种以可溶性重组蛋白 为活性物质的治疗性药物经批准上市，但并非所有外源基因均能实现可溶性高表达，因此重组蛋 白的可溶性高表达具有重要研究价值。在总结近年提高经大肠杆菌可溶性表达重组蛋白产率研 究的基础上，从启动子的选择、ＳＤ序列的引入、信号肽的优化、宿主细胞的选择、共表达其他蛋白 质，高密度发酵等方面阐释在大肠杆菌中提高可溶性重组蛋白表达产率的方法。 关键词　大肠杆菌　可溶性表达　高密度发酵　分子伴侣　核酸酶 中图分类号　Ｑ５９１．２ 　　重组蛋白的出现极大地扩充了可用于生化及结构 水性信号肽能够引导重组蛋白至周质空间。 胞质内 ② 生物学研究的蛋白质种类，值得注意的是，仅在２００３～ 表达。为了克服胞质内的还原性环境，可以选择胞质 ２００６年就有３１种重组蛋白作为治疗性蛋白质经ＦＤＡ 重要还原酶（如谷胱甘肽还原酶ｇｏｒ及硫氧还蛋白还原 ［１］ 酶ｔｒｘＢ）的突变型菌体作为工程菌，这类工程菌能够有 批准上市 。尽管多种非细菌类重组蛋白表达系统， 如酵母，哺乳动物细胞等表达系统得以逐渐完善，但大 效降低大肠杆菌胞质内的还原性，从而有助于胞质内 肠杆菌作为宿主在重组蛋白的表达上仍然具有显著优 表达的重组蛋白形成正确的二硫键。同时部分蛋白酶 ［２８］ （如ｌｏｎ和ｏｍｐＴ蛋白酶等）基因缺陷型工程菌能够避 势 。大肠杆菌表达系统相比于其他表达系统具有 培养周期短、培养条件容易获得、目的蛋白表达水平高 免重组蛋白在胞质内被蛋白酶降解。本文将从启动子 等特点。但相比真核细胞，大肠杆菌无法实现蛋白质 的选择、ＳＤ序列的引入、信号肽的优化、宿主细胞的选 转录后的修饰，同时大肠杆菌胞质内还原性环境不利 择、共表达其他蛋白质，高密度发酵等方面综述提高可 于蛋白质分子内或分子间二硫键的形成，造成重组蛋 溶性表达重组蛋白产率的研究策略。 白部分折叠、错误折叠或未折叠进而导致重组蛋白无 １　提高可溶性表达重组蛋白产率的策略 法实现可溶性表达。为实现重组蛋白的可溶性表达， 常用的思路有两种： 周质空间表达。大肠杆菌周质 １．１　启动子的选择 ① 空间是指细胞膜与细胞壁间的狭窄空间，周质空间内 　　启动子及其他载体元件能够显著影响目的基因转 的氧化性环境能够促进正确二硫键的形成，同时其内 录的强度与持续性，进而影响目的蛋白产率。合适的 ［９］ 启动子应当具有以下三个特征： 能够实现目的基因 部