三DNA的复制.pptVIP

第二章染色体与DNA DNA的复制(DNA Replication) 由于DNA分子由两条多核苷酸链组成，两条链上的碱基——G只能与C相配对，A只能与T相配对，所以，两条链是互补的，一条链上的核苷酸排列顺序决定了另一条链上的核苷酸排列顺序。 DNA的复制特点 DNA的半保留复制 DNA的半不连续复制 复制的起点、方向和速度 复制的几种主要方式 2.3.1DNA的半保留复制（semi-conservative replication） DNA在复制过程中，每条链分别作为模板合成新链，产生互补的两条链。这样新形成的两个DNA分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。因此，每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的，这种复制方式被称为DNA的半保留复制。 DNA的半不连续复制（semi-discontinuous replication） 由于DNA双螺旋的两条链是反向平行的，因此在复制叉附近解开的DNA链一条是5→3方向，另一条是3→5方向，两个模板极性不同。而所有已知DNA聚合酶的合成方向都是5→3，两条链无法同时进行复制。为了解释DNA的等速复制现象，日本学者冈崎（Okazaki）等提出了DNA的半不连续复制模型。 半不连续复制Semi-discontinuous replication:冈崎片段Okazaki fragment 1、用3H脱氧胸苷短时间标记后提取DNA，得到不少平均长度为2-3kb DNA片段。 2、用DNA连接酶温度敏感突变株进行实验，在连接酶不起作用的温度下，有大量小片段累积，说明复制过程中至少有一条链首先合成较短的片段，然后再生成大分子DNA。 3、前导链的连续复制和滞后链的不连续复制在生物界是有普遍性的，因而称之为DNA的半不连续复制。 2.3.2 复制的起点、方向和速度 复制时，双链DNA要解开成两股链分别进行，所以，复制起点呈叉子形式，被称为复制叉(Replication fork)。 DNA的复制是由固定的起始点开始的。一般把生物体的复制单位称为复制子（replicon），一个复制子只含一个复制起点。 原核细胞DNA的半不连续复制过程 部分生物复制子的比较 细菌、病毒和线粒体的DNA分子都是作为单个复制子完成复制的； 真核生物基因组可以同时在多个复制起点上进行双向复制，也就是说它们的基因组包含有多个复制子。 A. DNA仅用[3H]胸腺嘧啶标记10 min 即压X光片； B. DNA在[3H]标记10 min 后又继续非标记合成10 min，导致X光片上的复制叉变长，银颗粒分布广而稀少。 2.3.3 复制的几种主要方式 2.3.3.1 线性DNA双链的复制 2.3.3.2 环状DNA双链的复制 (1) θ型 (2) 滚环型(rolling circle) (3) D-环型(D-loop) 环状DNA双链的复制-θ型 1968年Gilbert提出滚环复制模型: （1）共价延伸； （2）模板链和新合成的链分开； （3）不需RNA引物，在正链3－OH上 延伸； （4）只有一个复制叉； （5）形成多联体（concatemer）。 哪些DNA进行滚环复制? 真核rDNA的扩增, F因子DNA的转移, λ裂解途经的复制, φX174, M13. G4等 单链环状DNA噬 菌体 第二阶段复制都是进行滚环复制的. D loops 谢谢！ * * DNA的半保留复制 Semi-conservative mechanism 15N labeling experiment 1958年，Meselson和Stahl研究了经15N标记3个世代的大肠杆菌DNA，首次证明了DNA的半保留复制。 DNA的半保留复制保证了DNA在代谢上的稳定性，与DNA的遗传功能相符合。 [3H] Thymidine pulse-chase labeling and alkaline sucrose gradient: discovery of semi-discontinous replication 半不连续复制 生物化学教学课件 半不连续复制 冈崎片段：间断的后随链片段 Replicon（复制子）is a unit of the genome in which DNA is replicated; contains an origin for initiation of replication. Replication fork（复制叉）is the point at which strands of parental duplex DNA are separated so that replication