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专题：DNA粗提取
专题5：DNA和蛋白质技术 课题1：DNA的粗提取与鉴定
一、基本原理：
阅读思考：
1、提取DNA会涉及到哪些杂质？
2、将DNA提取出来的原理是什么？
2、如何鉴定DNA的存在？
小结：一、基础知识：
**一】、提取DNA的原理方法：
1、据DAN的溶解性：
DNA和蛋白质等在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同
2、DNA不溶于酒精，蛋白质则溶于酒精
3、DNA对酶、高温、洗涤剂的耐受性强
蛋白酶水解蛋白质
高温使蛋白质变性
洗涤剂破坏细胞膜
但DNA不会因此被破坏
**二】、苯胺的鉴定原理:
DNA+二苯胺 蓝色物质
0
100 C
二、实验设计：
阅读合作学习思考：
1、适宜DNA提取的生物材料，他们的共同特性是什么？ 鸡的红细胞有核吗？
2、动植物细胞破碎的方法为何不同？
3、p55旁白？
4、方案一、二、三中：
2mol/L、0.14mol/L作用？
用蛋白酶、60—75度处理滤液目的是什么？
**小结:二.实验设计
动物细胞
植物细胞
+H2O?
搅拌?
+洗涤剂？
+NaCl？
研磨
过滤？
取滤液
1]. 过滤取滤液
2mol/LNaCl?
+H2O?
0.14mol/L?
过滤
DNA?
2mol/L
NaCl
过滤
滤液
2].+蛋白酶？
3].60---75度？
水浴10—15分
丝状物
+冷酒精2—3分
搅拌？
2mol/L
NaCl
二苯胺
思考:
1.实验中有2次加H2O目的?
2.四次过滤,目的?DNA在哪?
3.三次加NaCl目的?
100度5分钟
答：1.第一次加水：破碎动物细胞；
第二次加水：稀释NaCl---0.14mol/L
为析出DNA的浓度
2.2mol/L时的过滤取滤液,DNA在滤液中;
0.14mol/L取粘物,DNA在粘物中
3.三次加NaCl(2mol/L)---都是为溶解DNA,
鸡血+柠檬酸钠 取沉淀10ml+20mlH20 3—4层纱布
20ml离心 一方向搅拌 过滤
40ml
2mol/l，NaCl
同一方向搅拌
过滤
沿壁加水至500ml
缠于玻璃棒
上DNA
粘物+2mol/LNaCl
20ml，搅拌3分
过滤或
离心15分
滤液或上清夜
50ml冷酒精
同方向慢搅拌
1].2ml2mol/L
NaCl+DNA+二苯胺
2].2mlNaCl+二苯胺
小结：动物细胞粗提取DNA：
水浴100度
0.14mol/L NaCl
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