象耳豆根结线虫hsp70基因的克隆与原核表达-植物病理学报.pdfVIP

植物病理学报 ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４５(１):７￣１３(２０１５) ｄｏｉ:１０.１３９２６/ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０１.００２ 象耳豆根结线虫 Ｈｓｐ７０基因的克隆与原核表达 １ꎬ２ ２ ２ ２∗ 练冬梅 ꎬ王会芳 ꎬ赵志祥 ꎬ陈绵才 １ ( 海南省农科院农业环境与植物保护研究所/ 海南省植物病虫害防控重点实验室ꎬ海口５７１１００ꎻ ２ 海南大学环境与植物保护学院ꎬ海口５７１１０１) 摘要:采用ＲＴ￣ＰＣＲ、ｃＤＮＡ末端快速扩增法(ＲＡＣＥ)ꎬ克隆了象耳豆根结线虫Ｈｓｐ７０基因的全长 ｃＤＮＡ(ＭｅＨｓｐ７０)序列ꎮ ＭｅＨｓｐ７０ｃＤＮＡ全长２２０３ｂｐꎬ含有１９５９ｂｐ 的开放阅读框ꎬ编码６５３个氨基酸ꎬ相对分子量为７１.０９ｋＤａꎬ具有３段Ｈｓｐ７０家族 的签名序列ꎬＧｅｎＢａｎｋ 登录号ＫＦ７３９４３４ꎮ 同源性分析表明ꎬ氨基酸序列与其他真核生物的Ｈｓｐ７０序列具有很高的相似性ꎮ 该 Ｈｓｐ７０与其他物种中的Ｈｓｐ７０进行系统进化分析ꎬ结果显示ꎬＨｓｐ７０的系统发育树不能体现物种间的亲缘关系ꎬ推测其反映的 是不同物种间Ｈｓｐ７０ 生物学功能的相似性程度ꎮ 构建了一个原核表达载体 ｐＥＡＳＹ￣Ｅ１￣ＭｅＨｓｐ７０ꎬ当ＩＰＴＧ 终浓度为 ０.４~１.０ｍｍｏｌ/ Ｌ时ꎬ能诱导表达融合蛋白ꎮＭｅＨｓｐ７０基因的克隆和表达ꎬ将为象耳豆根结线虫的生态适应性机理研究提供依据ꎮ 关键词:象耳豆根结线虫ꎻＨｓｐ７０ꎻ克隆ꎻ表达 Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｈｓｐ７０ ｆｒｏｍ Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｅｎｔｅｒｏｌｏｂｉｉ　 ＬＩＡＮ １ꎬ２ ２ ２ ２ １ Ｄｏｎｇ￣ｍｅｉ ꎬＷＡＮＧ Ｈｕｉ￣ｆａｎｇ ꎬＺＨＡＯ Ｚｈｉ￣ｘｉａｎｇ ꎬＣＨＥＮ Ｍｉａｎ￣ｃａｉ 　 ( Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ＆Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃ￣ ｔｉｏｎꎬＨａｉｎａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＨａｉｎａｎ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅｓａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｐｅｓｔｓ ꎬＨａｉｋｏｕ ２ ５７１１００ꎬＣｈｉｎａꎻ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ＣｏｌｌｅｇｅꎬＨａｉｎａｎ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨａｉｋｏｕ ５７１１０１ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ (ＭｅＨｓｐ７０) ｏｆ Ｈｓｐ７０ ｆｒｏｍ Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｅｎｔｅｒｏｌｏｂｉｉ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＲＴ￣ＰＣＲꎬｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ ( ＲＡＣＥ) . Ｔｈｅ ｆｕｌｌ￣ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｏｆ ＭｅＨｓｐ７０ ｗａｓ ２ ２０３ ｂｐ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｎ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ (ＯＲＦ)ｏｆ １９５９ｂｐ ｅｎｃｏｄｉｎｇａｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｏｆ６５３ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｗｉｔｈ ａｐｒｅｄｉｃ￣ ｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｓｓ ｏｆ ７１.０９ ｋＤａꎬｗｈｉｃｈ ｃａｒｒｉｅｄ ｔｈｒｅｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ａｎｄ ｉｎｔａｃｔ Ｈｓｐ７０ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓꎬｗｈｉｃｈ ｗａｓｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄｉｎＧｅｎＢａｎｋ ｗｉｔｈａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ.ＫＦ７３９４３４.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ￣ａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｈｉｇｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｔｏ ｏｔｈｅｒ ｅｕｋａｒｙａ.ＴｈｅＨｓｐ７０ｓｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｒｅｆｌｅｃｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅ