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植 物 分 类 与 资 源 学 报 ２０１４ꎬ３６ (５): ６２２~６２８
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ:１０.７６７７/ ｙｎｚｗｙｊ２０１４１３２２５
鸭梨ＡＣＣ氧化酶基因ｃＤＮＡ片段的克隆及农杆菌
介导的反义遗传转化∗
１ ２ ３
齐 靖 ꎬ 董 祯 ꎬ 张玉星
(１河北经贸大学生物科学与工程学院ꎬ 河北 石家庄 ０５００６１ꎻ２ 河北女子职业技术学院ꎬ
河北 石家庄 ０５００９１ꎻ ３ 河北农业大学园艺学院ꎬ 河北 保定 ０７１００１)
摘要: 研究根据ＡＣＣ氧化酶基因的保守序列设计一对特异性引物ꎬ 以鸭梨果实为试材ꎬ 借助ＲＴ￣ＰＣＲ方
法扩增得到一条长度为８３１ｂｐ 的鸭梨ＡＣＣ氧化酶基因ｃＤＮＡ片段ꎬ 该片段编码２７６个氨基酸残基ꎬ 与其
它梨品种ＡＣＣ氧化酶基因序列同源性均在９４％以上ꎮ 将此片段反向插入真核表达载体 ｐＢＩ１２１的ＣａＭＶ
３５Ｓ启动子和ＮＯＳ终止子之间ꎬ 构建了鸭梨ＡＣＣ氧化酶基因的反义表达载体ꎬ 并在农杆菌ＬＢＡ４４０４ 的介导
下实现对鸭梨组培苗的遗传转化ꎮ 经ＰＣＲ鉴定证实共有４株鸭梨组培苗中外源基因得到成功转化ꎬ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ
杂交显示在这４株转基因鸭梨中除有１株外源基因呈双拷贝外ꎬ 其余３株中外源基因均以单拷贝形式存在ꎮ
关键词: 梨ꎻ ＡＣＣ氧化酶ꎻ ＲＴ￣ＰＣＲꎻ 反义表达载体ꎻ 遗传转化
－ － －
中图分类号: Ｑ７８４ 文献标识码:Ａ 文章编号:２０９５ ０８４５(２０１４)０５ ６２２ ０７
Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ＡＣＣ Ｏｘｉｄａｓｅ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｙａｌｉ Ｐｅａｒ ａｎｄ
Ｔｒａｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒ
ｗｉｔｈ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ
１ ２ ３
ＱＩ Ｊｉｎｇ ꎬＤＯＮＧＺｈｅｎ ꎬＺＨＡＮＧ Ｙｕ￣Ｘｉｎｇ
(１Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＨｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ ＢｕｓｉｎｅｓｓꎬＳｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００６１ꎬＣｈｉｎａꎻ
２Ｈｅｂｅｉ Ｗｏｍｅｎ′ｓ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ＣｏｌｌｅｇｅꎬＳｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００９１ꎬＣｈｉｎａꎻ３ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＨｅｂｅｉꎬＢａｏｄｉｎｇ０７１００１ꎬＣｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬａ ｐａｒｔｉａｌ ＡＣＣ ｏｘｉｄａｓｅ (ＡＣＯ) ｇｅｎｅ￣ｌｉｋｅ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ￣
ｂａｓｅｄ ｃｌｏｎｉｎｇ ｆｒｏｍＹａｌｉ (Ｐｙｒｕｓ ｂｒｅｔｓｃｈｎｅｉｄｅｒｉｃｖ. ‘Ｙａｌｉ’)ｐｌａｎｔ.Ｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｈｉｇｈｌｙｃｏｎ￣
ｓｅｒｖｅｄ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ＡＣＯ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓꎬａｎｄ ＲＴ￣ＰＣ
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