高密度发酵解脂假丝酵母生产rna的工艺研究-中国药科大学学报！.pdfVIP

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１１，４２（４）：３６９－３７４ ３６９ 高密度发酵解脂假丝酵母生产 ＲＮＡ的工艺研究 １ １ １ １ ２ ２ １ 林　忠 ，罗众球 ，窦　洁 ，王　慧 ，邱蔚然 ，曹　静 ，周长林 １ ２ （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９；南通秋之友生物科技有限公司，南通２２６２３６） 摘　要　为进一步优化ＲＮＡ生产工艺，通过对解脂假丝酵母发酵培养，研究了ｐＨ、溶氧、还原糖浓度、高密度补料分批 发酵和高密度连续发酵等因素对ＲＮＡ产量及还原糖转化成菌体的转化率（ｇＤＣＷ／ｇｒｅｄｕｃｉｎｇｓｕｇａｒ）的影响。实验结果表明， 最佳培养条件为ｐＨ４，溶氧３０％。在分批发酵中，培养基糖浓度为４０ｇ／Ｌ时，最高ＤＣＷ （ｄｒｙｃｅｌｌｗｅｉｇｈｔ）可达１９５ｇ／Ｌ，培 养时间为８ｈ，ＲＮＡ最高含量达到１４３％（ｇＲＮＡ／ｇＤＣＷ），转化率为４８２％。在最佳ｐＨ和溶氧条件下进行ｐＨｓｔａｔ补糖分 批发酵，控制罐内培养基糖浓度始终维持在 １５ｇ／Ｌ以下，最高核酸含量达到 １４２％，转化率达到４３５％，最高菌体浓度 ３５６ｇ／Ｌ，比４０ｇ／Ｌ糖浓度条件下分批发酵时的菌体浓度提高了７５％。在此基础上进行高密度连续发酵，最终结果与高密 度分批发酵相似。首次实现了高密度发酵解脂假丝酵母制备ＲＮＡ。 关键词　ＲＮＡ；生产工艺；解脂假丝酵母；溶氧；分批补料发酵 中图分类号　Ｑ８１５　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１１）０４－０３６９－０６ ＦｅｒｍｅｎｔａｔｏｎｐｒｏｃｅｓｓｆｏｒｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＲＮＡｆｒｏｍＣａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ １ １ １ １ ２ ２ １ ＬＩＮＺｈｏｎｇ牞ＬＵＯＺｈｏｎｇｑｉｕ牞ＤＯＵＪｉｅ牞ＷＡＮＧＨｕｉ牞ＱＩＵＷｅｉｒａｎ牞ＣＡＯＪｉｎｇ牞ＺＨＯＵＣｈａｎｇｌｉｎ １ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牷 ２ＮａｎｔｏｎｇＱｉｕｚｈｉｙｏｕＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ牞Ｌｔｄ牞Ｎａｎｔｏｎｇ２２６２３６牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ牞ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｐＨ牞ｄｉｓｓｏｌｖｅｄｏｘｙｇｅｎ牗ＤＯ牘ａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇｓｕｇａｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ牞ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙ ｂａｔｃｈｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎＲＮＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇｓｕｇａｒｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｒａｔｅ牗ｇＤＣＷ／ｇＧｌｕｃｏｓｅ牘ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＣａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｃａｌｉｓＩｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉ ｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗａｓｏｆｐＨ４ａｎｄＤＯｏｆ３０％Ｉｎｂａｔｃｈｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ牞１９５ｇ／Ｌｏｆｄｒｙｃｅｌｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗａｓｏｂ ｔａｉｎｅｄａｔ４０ｇ／Ｌｒｅｄｕｃｉｎｇｓｕｇａｒａｎｄｔｈｅｔｏｔａｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｉｍｅｗａｓ８ｈａｎｄｔｈｅＲＮＡｌｅｖｅｒｒｅａｃｈｅｄ１４３％Ｉｎ ｐＨｓｔａｔｆｅｄｂａｔｃｈｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｙｐＨａｎｄＤＯａｔｏｐｔｉｍａｌｌｅｖｅｌｓ牞ｃｅｌｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒｅａｃｈｅｄ３５６ｇ／Ｌｗｈｉｃｈｗａｓ ７５％ ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆ１９５ｇ／Ｌ牗４０ｇ／Ｌｇｌｕｃｏｓｅ牘ｗｉｔｈｔｈｅＲＮＡｌｅｖｅｌｏｆ１４２％ａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇｓｕｇａｒｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｒａｔｅｏｆ４３５％．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｈｉｇｈｄｅ