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* * 所采用技术的理论基础 植物细胞工程 通常采用的技术手段 植物组织培养 植物体细胞杂交 植物细胞的全能性 动物细胞工程： 1.动物细胞培养 2.动物细胞融合 3.单克隆抗体 4.胚胎移植 5.核移植 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养 怎样进行动物细胞的培养？ （1）、动物细胞培养液的主要成分是什么？ （2）、动物细胞培养液与植物组织培养基相比有何独特之处？ （3）、为什么选用幼龄动物胚胎或其组织、器官做动物细胞培养材料？ （4）、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ （5）、为什么要选用胰蛋白酶分散细胞？ （6）、如何界定原代培养和传代培养、细胞株和细胞系？ （7）、动物细胞培养能否像植物组织细胞培养那样，最终培养成生物个体？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？ 较植物组培培养基有何独特之处？ 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 动物细胞培养液的主要成分： 与植物培养基相比独特之处： （1）液体培养基 （2）含有动物血清 动物体细胞大都生活在液体的环境 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。其中有些氨基酸动物本身不能合成，必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促帖附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%~20%的血清。 2、为什么选用幼龄动物胚胎或其组织、 器官做动物细胞培养材料？ 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛， 分裂能力强 3、为什么细胞培养要分散成单个细胞培养？ 分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的营养容易供应，代谢废物容易排除；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排除都较困难，因此，这些细胞在体外长时间的生存和生长较困难。 4、为什么要选用胰蛋白酶分散细胞？ 用胃蛋白酶行吗？ 进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高 5、如何界定原代培养和传代培养、细胞株 和细胞系？ 胚胎或幼龄动物的组织器官 单个细胞 细胞悬浮液 细胞株 细胞株 剪碎 加培养液 制成 传代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白 原代培养 传代培养 原代细胞 细胞系 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成 细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 6、动物细胞培养能否像植物组织细胞 培养那样，最终培养成生物个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多， 不能发育成新的动物个体 获得细胞 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 7、植物细胞和动物细胞培养的比较 动物细胞培养应用 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 二、动物细胞融合 细胞核 病毒颗粒 细胞核 灭活的病毒颗粒黏附在细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿过 细胞膜连接 二、动物细胞融合 细胞融合，形成杂种细胞 细胞融合方法 化学：PEG（聚乙二醇） 物理：电融合 生物：灭活的病毒（仙台病毒） 仙台病毒 紫外线 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒