葡萄霜霉病和白粉病拮抗菌的分离鉴定和HerNe激光-江苏农业科学.PDFVIP

— １２２— 江苏农业科学　２０１３年第４１卷第８期 付瑞敏，韩鸿鹏，张丽琴，等．葡萄霜霉病和白粉病拮抗菌的分离、鉴定和Ｈｅ－Ｎｅ激光诱变［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（８）：１２２－１２５． 葡萄霜霉病和白粉病拮抗菌的分离、鉴定 和Ｈｅ－Ｎｅ激光诱变 １，２ １ １ １ １ １ １ １ １ ２ 付瑞敏 ，韩鸿鹏 ，张丽琴 ，张　红 ，常慧萍 ，邢文会 ，杨　雪 ，刘春雷 ，王　丁 ，陈五岭 （１．河南教育学院，河南郑州４５００４６；２．西北大学，陕西西安７１００６９） 　　摘要：从葡萄果园土壤中筛选出可有效抑制葡萄致病菌葡萄白粉病病原菌和葡萄霜霉病病原菌生长的菌株，通过 表型生理学、生物化学研究，筛选出的菌株ＰＴ４被鉴定为枯草芽孢杆菌。为了增强ＰＴ４菌株的拮抗能力，对其进行 Ｈｅ－Ｎｅ激光诱变，获得６株突变株，通过拮抗力和遗传稳定性的检测，对葡萄白粉病病原菌和葡萄霜霉病病原菌拮抗 性最强的突变株ＰＴ４６被挑选出来。根据试验结果，认为Ｈｅ－Ｎｅ激光诱变拮抗菌的方法可以应用于葡萄霜霉病和葡 萄白粉病的生物防治领域。 　　关键词：葡萄；霜霉病；白粉病；拮抗菌；激光 诱变 　　中图分类号：Ｑ９３３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）０８－０１２２－０３ 　　葡萄以其独特的风味、丰富的营养价值和保健价值，成为 作提供技术支撑。 当今世界各国竞相发展的一种水果产业。近年来，随着人工 １　材料与方法 栽培葡萄面积的不断扩大，葡萄病害的危害也在逐年加重，有 的病害已经成灾，严重影响了葡萄的品质，制约着葡萄产业的 １．１　供试菌种 发展。引起葡萄病害的主要病原菌是葡萄白粉病和葡萄霜霉 致病菌葡萄白粉病病原菌（Ｕｎｃｉｎｕｌａｎｅｃａｔｏｒ）和葡萄霜霉 病病原菌，前者主要侵染葡萄的绿色部分尤其是幼嫩组织，后 病病原菌（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａｖｉｔｉｃｏｌａ）从陕西省微生物研究所获得， ［１－２］ 者能引起葡萄严重落叶，对葡萄树体危害严重 。 病原菌生长在ＰＤＡ平板上，３０℃保存。 生物防治具有安全、无毒、有效、经济的优势，对建立绿色 １．２　器械 ［３］ 有机葡萄生产体系具有战略性意义 。过去的２０年来，植物 Ｔ３型Ｈｅ－Ｎｅ激光发生器（波长６３２ｎｍ，功率 １０ｍＷ）， 病原菌的生物防治已经涌现出多种多样的防治策略。一些拮 使用光斑为１．５ｍｍ，西北大学光电厂提供。 抗性细菌，比如农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、 １．３　培养基 假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）被认为在作物保护中具有有益效果。 牛肉膏蛋白胨培养基（ＮＡ平板）；马铃薯培养基；摇瓶种 拮抗性微生物的分离和筛选对于生物防治的应用具有重要作 子培养基。 用，假单胞菌的使用已有很长历史，近年来又强调了芽孢杆菌 １．４　试实验方法 的使用，人们对于枯草芽孢杆菌的使用表现出极大兴趣［４－５］。 １．４．１　细菌的分离　菌株分离自陕西渭南患病葡萄果园土 同时，拮抗菌的育种工作引起了很多科学家的关注，现代 壤。所有试验操作在无菌环境中完成。取 １０ｇ土壤，晒干后 的基因工程技术和代谢工程技术都被认为是微生物育种中行 研碎，于无菌条件下加入９０ｍＬ无菌水中，混合后用磁力搅拌 －５ －６ －７ 之有效的方法，但是这种现代技术的应用总是遭遇到各种障 器振荡搅拌３０ｍｉｎ，连续稀释成 １０ 、１０ 、１０ 的梯度浓度 碍，因此，传统的育种方法仍是获得改良菌株的有效途径。低