基因工程的基本操作程序().pptVIP

用DNA探针从基因文库中准确提取 目的基因 把DNA分子双链解开，根据所需的基因核苷酸序列制成一段与之互补的核苷酸短链，并用同位素标记，即成探针。用这一探针查基因文库中已经解旋的DNA片段，如果有一片段与探针片段发生互，这一片段就含有所需的的基因。 2）人工合成 反转录法：已知其mRNA 的序列 单链 DNA 双链DNA 化学合成法：已知其翻译产物的氨基酸序列 推测 推测 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核 苷酸序列 目的基因 PCR——聚合酶链式反应 扩增过程：加热DNA变性解旋 引物与单链互补结合 在DNA聚合酶作用下进行延伸 （指数形式扩增。） 基因表达载体的构建 目的基因 启动子 位置：基因的首端 功能：RNA聚合酶识别和结合的 组成 部位，驱动基因转录mRNA 终止子 位置：基因的尾端 功能：终止转录 标记基因 ： 鉴别受体细胞是否有目的基因 　　多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 * 专题1 基因工程 基因工程的基本操作程序主要包括 四个基本步骤： 1）目的基因的获取 2）基因表达载体的构建 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测与鉴定 步骤一：目的基因的获取 目的基因是人们所需要转移或改造的基因, 可以从现有的物种中分离出来也可以人工合成。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 目的基因的获得方法 从基因文库获得 基因文库 人工合成 利用PCR技术扩增 基因组文库 部分基因文库 提取、合成 增加数量 1）从基因文库中获取目的基因： 基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library) 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库. 用DNA重组技术将某种生物的总DNA用特定的限制性内切酶切割成一个个片段，然后将这些片段随机地连接在某些质粒或其他载体上，再将它们转移到适当的宿主细胞中，通过细胞的增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆），当这些克隆多到可以包括某种生物的全部基因时，这一批克隆的总体就称为该种生物的基因文库。这一定义也适用于线粒体DNA和叶绿体DNA，分别称为某种生物的线粒体基因文库或叶绿体基因文库。为了有效地保存基因文库，可通过细菌在固体培养基上繁殖而使包含各个特定DNA片段的细菌增多。通过分子杂交的方法，可以筛选出包含有所需基因的DNA片段的细菌（或噬菌体）。经过扩增得到大量这样的细菌（或噬菌体），从中便可分离出所需基因的DNA片段。建立和使用基因文库是分离高等真核生物基因的有效手段，对于基因定位和基因工程的研究都很有用。 哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？ 1）DNA序列自动测序仪： 2）PCR技术扩增目的基因： 对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。 步骤二：基因表达载体的构建 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细