家鸭细胞色素c氧化酶ⅲcoⅲ基因的克隆及序列分析.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（３）：５４～５９ 家鸭细胞色素Ｃ氧化酶 （ＣＯ ）基因的克隆 Ⅲ Ⅲ 及序列分析 １ １ ２ １ １ １ １ 张　娟 　张利平 　宗　卉 　吴建平 　朱建勇 　杨　联 　孙永峰 （１甘肃农业大学动物科学技术学院　兰州　７３００７０　２深圳检验检疫局　深圳　５１８０００） 摘要　线粒体是存在于绝大多数真核细胞内的一种基本的、重要的细胞器，是细胞进行氧化磷酸 化的场所。不同脊椎动物同源基因序列的比较显示，细胞色素 ｂ（Ｃｙｔｂ）、细胞色素 Ｃ氧化酶 Ⅰ （ＣＯ ）、细胞色素Ｃ氧化酶 （ＣＯ ）、细胞色素Ｃ氧化酶 （ＣＯ ）基因最保守，同源性最高， Ⅰ Ⅱ Ⅱ Ⅲ Ⅲ ＡＴＰａｓｅ６、ＡＴＰａｓｅ８基因、ＮＤ基因变异比较大。以家鸭（Ａｎａｓｐｌａｔｙｒｈｙｎｃｈｏｓ）肝脏的线粒体ＤＮＡ为 模板，按照ＧｅｎＢａｎｋ已经公布的潜鸭族（ＡＦ０９０３３７）的全序列及其绿头鸭的ｍｔＤＮＡ部分序列 （Ｌ２２４７６、Ｌ１６７７０、Ｌ２２４７７）设计合成特异引物进行ＰＣＲ扩增，克隆并测定了线粒体细胞色素Ｃ氧 化酶 亚基（ＣＯ ）的全序列７８４ｂｐ以及 ＡＴＰａｓｅ６基因的３′端和 ｔＲＮＡＧｌｙ基因的５′端序列共 Ⅲ Ⅲ ９３４ｂｐ。用ＤＮＡＳｔａｒ分析软件对家鸭与ＧｅｎＢａｎｋ中７种禽类的ＣＯ 序列进行比较分析，显示家鸭 Ⅲ 与这些动物的ＣＯ 基因具有较高的同源性，与同科潜鸭属中的Ａｙｔｈｙａａｍｅｒｉｃａｎａ的相似性最高为 Ⅲ ９０．６％，与同目不同科的加拿大雁、小天鹅、白额雁的相似性分别为８９％、８８．６％、８８．６％。根据 家鸭与其他７种禽类的ＣＯ 基因序列相似性所建立的进化树，与传统的分类地位基本吻合。 Ⅲ 关键词　家鸭　细胞色素Ｃ氧化酶 （ＣＯ ）　同源性　系统学 Ⅲ Ⅲ 中图分类号　Ｑ７８５ 　　线粒体是共价闭合的双链 ＤＮＡ，是生物有氧呼吸 实验拟用分子生物学方法对家鸭ＣＯ 基因进行研究， Ⅲ 的主要场所。线粒体基因组结构简单，发生变异的几 通过ＰＣＲ扩增，克隆测序得到线粒体细胞色素氧化酶 率相对稳定，被广泛用于系统的起源、进化和亲缘关系 （ＣＯ ）基因的全序列及其 ＡＴＰａｓｅ６和ｔＲＮＡＧｌｙ基 Ⅲ Ⅲ 的研究［１～３］。动物线粒体基因组（ｍｔＤＮＡ）中含有细 因的部分序列。目的是对家鸭的ＣＯ 基因进行全面 Ⅲ 胞色素氧化酶３个亚基单位（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｏｘｉｄａｓｅｓｕｂｕｎｉｔ 的认识，为进一步研究线粒体ＤＮＡ在分子遗传学和发 ， ， ，缩写ＣＯ ，ＣＯ ，ＣＯ ）、Ｃｙｔｂ、ＡＴＰａｓｅ６、 育生物学中的作用提供理论依据。 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ ＡＴＰａｓｅ８等１３个蛋白质基因，都是线粒体内膜呼吸链 ［４］ １　材料和方法 的重要组分 ，其中ＣＯ ，ＣＯ ，ＣＯ 最保守，同源性 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 达８０％左右，对其序列进行克隆和分析是研究远缘物 １．１　实验材料 种分子系统演化