靶向树突状细胞的呼吸道合胞病毒F重组蛋白的构建与体外活性分析.pdfVIP

第 4O卷 第 6期 北 京 交 通 大 学 学 报 Vo1．40No．6 2016年 12月 JOURNALOFBEUING jIA0T0NGUNIVERSITY Dec．2016 文章编号：1673—0291(2016)06—0127—07 DOI：10．118605．issn．1673—0291．2016．06．021 靶 向树突状细胞的呼吸道合胞病毒 F重组蛋 白 的构建与体外活性分析 华 颖，彭向雷，付远辉 ，郑妍鹏，洪 涛，何金生 (北京交通大学 生命科学与生物工程研究院，北京 100044) 摘 要 ：分析 以人呼吸道合胞病毒 (Humanrespiratorysyncytialvirus，RSV)融合糖蛋 白(fusion glycoprotein，F)为抗原靶 向DEC205／CD205受体策略对重组F蛋白表达及活性的影响．F蛋 白是 RSV 的重要 中和抗 原，克隆 RSV F蛋 白胞 外 区的编码基 因至可识 别 鼠树 突状 细胞 (Dendritic cells，DCs)DEC205受体的单链抗体 (singlechainantibodyofanti—DEC205，scDEC)的C端 ，构建 可表达重组F蛋白(scDECF)的质粒 pVAX1／scDECF，Westernblot方法检测 scDECF的表达，免 疫荧光法和流式细胞术检测表达的 scDECF与 DEC205受体的结合活性．经 Westernblot证实在 pvAX1／scDECF转柒的 293T细胞成功表达 了 scDECF．将所获得 的细胞培养上清与表达 鼠 DEC205受体的细胞 CHOmDEC205孵育，用免疫荧光和流式细胞术证 实：与作为对照的重组F蛋 白scIS0F相比，所获得的scDECF与CHOmDEC205细胞呈现明显的结合．本研究成功表达 了重组蛋 白scDECF，且所获得的重组蛋 白SCDECF具有与表达DEC205受体的细胞特异性结合的活性． 关键词：呼吸道合胞病毒；融合糖蛋 白；DEC205；树突状细胞；靶向疫苗 中图分类号：R392．12 文献标志码：A Construction ofrespiratorysyncytialvirusfusion glycoprotein targetingdendriticcellsand itsin vitroactivityanalysis HUA Ying。PENG Xianglei，FU Yuanhui，ZHENG Yanpeng， HoNG Ta0，HEJinsheng (CollegeofLifeSciences＆Bioengineering．BeijingJiaotongUniversity，Beijing100044，China) Abstract：Thisinvestigationwasimplementedby fusing thehuman respiratory syncytialvirus (RSV)fusionglycoprotein (F)extracellulardomaintoDEC205singlechainantibodyanddetec— tingtheactivityoftherecombinantprotein in vitro．F proteinisoneimportantantigen ofRSV andtargetingFproteintodendriticcells(DCs)mayhelptoenhancetheimmuneefficacyofvac— cine．Aftercloningthegeneencodingtheextracellulardomain oftheF proteinto 3 endofthe singlechainantibody specificformouseDEC205r