大孔树脂对三孢布拉霉菌产番茄红素的吸附性能研究-生物通.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（４）：７１７６ ? 大孔树脂对三孢布拉霉菌产番茄红素的吸附性能研究 李干禄　吴启赐　武振军　石　楠　万红贵 （南京工业大学生物与制药工程学院　南京　２１０００９） 摘要　为利用大孔吸附树脂分离纯化三孢布拉霉菌发酵液番茄红素，考察了４种大孔树脂 （ＨＰ２０，ＨＰ２ＭＧ，ＳＰ８２５，ＳＰ２０７）对番茄红素的吸附解吸特性，筛选出最佳树脂。结果表明， ＨＰ２０大孔树脂对番茄红素具有较好的吸附解吸性能，且吸附迅速，能在１ｈ内达到吸附平衡。用 含５５％和６０％异丙醇的丙酮不连续梯度洗脱，回收率可达８９．５５％，重结晶后可获得纯度９５％以 上的番茄红素，经红外、质谱、核磁等鉴定为天然型番茄红素。该方法简单，可操作性强，极具工 业应用价值。 关键词　三孢布拉霉菌　番茄红素　大孔树脂　不连续梯度洗脱 中图分类号　Ｑ８１９ 　　番茄红素（Ｌｙｃｏｐｅｎｅ）又名番茄烃，是一种具有 １１ １　材料与方法 个共轭双键的不饱和脂溶性天然色素，分子式 Ｃ Ｈ ， ４０ ５６ 分子量５３６．９，化学结构上属于类胡萝 卜素。在所有的 １．１　材料与试剂 类胡萝 卜素中，番茄红素对单线氧的消除能力最强，是 　　菌丝体为本实验室发酵所得；大孔树脂 ＨＰ２０、 胡萝 卜素的两倍，抗氧化作用也明显优于 胡萝 卜 β β ＨＰ２ＭＧ、ＳＰ２０７、ＳＰ８２５（北京绿百草公司）；甲醇、四氢 素，同时还具有清除自由基、诱导细胞分化、减少 ＤＮＡ 呋喃为色谱纯；丙酮、正己烷、石油醚、异丙醇等均为分 ［１２］ 损伤等作用 ，故其在消除氧自由基、降低癌症发病 析纯。 率、增强人体免疫功能以及防治心脑血管疾病方面具 １．２　仪　器 ［３］ 有良好的应用前景 。 　　高效液相色谱仪为Ａｌｌｔｅｃｈ２０００，色谱柱为Ａｌｌｔｉｍａ 　　目前国内应用的番茄红素主要从天然番茄中提 Ｃ１８，５ ，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；番茄红素标准品（Ｓｉｇｍａ公 μ 取，番茄中番茄红素的最高含量仅有 １４０～２００ｍｇ／ｋｇ， 司）；恒温振荡器ＤＳＨＺ３００Ａ（太仓实验设备厂）；玻璃 且成本较高、纯化工艺复杂。微生物发酵法生产具有 层析柱：１５ｍｍ×３００ｍｍ（上海锦华）；ＢｒｕｋｅｒＡＶ４００ Φ 成本低、污染小、生产周期短及工艺简单等优势，是番 ＭＨｚ傅立叶变换ＮＭＲ仪（瑞士Ｂｒｕｋｅｒ公司）。 茄红素工业化生产的趋势。番茄红素的纯化方法主要 １．３　实验方法 有大孔树脂吸附法、重结晶法和柱层析法等。大孔树 １．３．１　番茄红素粗提液制备　三孢布拉霉菌发酵液 脂是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂的有机高分子 经真空抽滤后，乙醇洗涤，干燥即得到干菌丝体。将菌 聚合物，是吸附作用和筛选作用相结合的分离材料，在 丝体球磨破壁，再经正己烷／丙酮混合液连续提取，提 天然食用色素等方面已有应用［４］。本文对微生物发酵 取液经真空浓缩后用适