沼气池污泥微生物总dna提取方法的比较-湖南师范大学.pdfVIP

第２０卷第６期 激　光　生　物　学　报 Ｖｏｌ．２０Ｎｏ．６ 　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 ２０１１年１２月 ＡＣＴＡ　ＬＡＳＥＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ　ＳＩＮＩＣＡ Ｄｅｃ．２０１１ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７７１４６．２０１１．０６．０２６ 沼气池污泥微生物总ＤＮＡ提取方法的比较 １ ２ａ ２ｂ ２ｂ １ １ １ １ 张　琳 ，熊格生 ，吴莎莎 ，卢向阳 ；吴俊文 ，许　凤 ，颜亨梅 ，刘如石 （１．湖南师范大学生命科学学院，湖南长沙４１００８１；２．湖南农业大学　ａ．科学技术师范学院； ｂ．生物科学技术学院，湖南长沙４１０１２８） 摘　要： 沼气发酵系统是一个复杂的生态系统，其污泥微生物超过９９％是不可培养的。为了优化沼气池纤维 素的转化效率、沼气的产率和开展污泥微生物多样性研究，本研究采用化学裂解法、溶菌酶裂解法和 ＱＩＡａｍｐ ＤＮＡＳｔｏｏｌＭｉｎｉＫｉｔ提取了沼气池污泥样品中微生物的总ＤＮＡ，对三种方法的ＤＮＡ得率、纯度、大片段提取效果 以及是否含有ＰＣＲ反应抑制剂进行了研究，最后对 １６ＳｒＲＮＡ基因Ｖ３区的扩增产物进行了ＰＣＲ变性梯度凝胶 电泳（ＰＣＲＤＧＧＥ）分析。与化学裂解法和ＱＩＡａｍｐＤＮＡＳｔｏｏｌＭｉｎｉＫｉｔ法相比，溶菌酶裂解法得到的ＤＮＡ量大、 片段长、片段分布广、ＰＣＲ扩增效率高；同时ＰＣＲＤＧＧＥ图谱显示，溶菌酶裂解法可更好地展示沼气池污泥中微 生物的多样性。该结果为进一步提高沼气池中纤维素的转化效率和沼气生产优势菌种的质和量打下了一定的 前期基础。 关键词： 沼气池污泥；总ＤＮＡ提取；ＰＣＲＤＧＧＥ；微生物多样性 中图分类号： Ｑ７８ 文献标识码： Ａ 文章编号： １００７７１４６（２０１１）０６０８４７０７ ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＴｈｒｅｅＰｒｏｔｏｃｏｌｓｆｏｒＴｏｔａｌＤＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆ ＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｉｎＢｉｏｇａｓＤｉｇｅｓｔｅｒｓ １ ２ａ ２ｂ ２ｂ ＺＨＡＮＧＬｉｎ，ＸＩＯＮＧＧｅｓｈｅｎｇ ，ＷＵＳｈａｓｈａ，ＬＵＸｉａｎｇｙａｎｇ ， １ １ １ １ ＷＵＪｕｎｗｅｎ，ＸＵＦｅｎｇ，ＹＡＮＨｅｎｇｍｅｉ ，ＬＩＵＲｕｓｈｉ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＨｕｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００８１，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ；２．ＨｕｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ａ．ＮｏｒｍａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｂ．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１２８，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｆｂｉｏｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｓａｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄｅｃｏｌｏｇｙｓｙｓｔｅｍ，ａｎｄｍｏｒｅｔｈａｎ９９％ｏｆｔｈｅｍｉｃｒｏ ｏｒｇａｎｉｓｍｓｉｎｂｉｏｇａｓｄｉｇｅｓｔｅｒｓａｒｅｕｎｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ．Ｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｃｅｌｌｕｌｏｓｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎａｎｄｂｉｏｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎ