羊种布氏杆菌3型omp25基因序列及其表达蛋白生物-江苏农业科学.pdfVIP

江苏农业科学　２０１６年第４４卷第４期 — ２５— 贺　容，张生珍，王　超，等．羊种布氏杆菌３型Ｏｍｐ２５基因序列及其表达蛋白生物信息学分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（４）：２５－２８． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．０４．００７ 羊种布氏杆菌３型 Ｏｍｐ２５基因序列 及其表达蛋白生物信息学分析 １ １ １ １ ２ ２ １ 贺　容 ，张生珍 ，王　超 ，刁正鹏 ，薛红梅 ，徐立青 ，李增魁 （１．青海大学农牧学院动物医学系，青海西宁８１００００；２．青海省地方病预防控制所，青海西宁８１００００） 　　摘要：为进一步研究外膜蛋白Ｏｍｐ２５的结构和功能，以羊种布氏杆菌３型青海省海晏县自然株为研究对象，通过 基因的克隆测序，采用生物信息学方法对外膜蛋白Ｏｍｐ２５基因及其编码的氨基酸序列的理化性质、分子结构、分子表 面可能性、柔韧性、亲水性、抗原指数、Ｂ细胞抗原表位进行了详细分析。结果显示：羊种布氏杆菌３型Ｏｍｐ２５分子一 级结构的氨基酸序列的各项参数存在５段共同区段，其中５９～７４、９３～１１２、１８２～２０２位氨基酸的各项生物信息学参 数尤为突出，是其Ｂ细胞表位优势区的可能性很大。 　　关键词：羊种布氏杆菌３型；Ｏｍｐ２５基因；序列测定；生物信息学分析 　　中图分类号：Ｓ８５５．９９　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）０４－００２５－０３ 　　羊布氏杆菌病是由布氏杆菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）引起的一种人畜 徐立青老师惠赠。 ［１］ 共患传染病，该病在全球范围内流行 ，临床特征为慢性疲 １．２　细菌的培养及基因组ＤＮＡ的提取 ［２］ 劳、波浪热、生殖系统损坏及全身性疾病 。青海省是人、畜 将布氏杆菌２３号划线于肝浸液固体培养基，生长２４ｈ。 见布氏杆菌病的高发区，１９５４年青海省首次分离出布氏杆 挑单个菌落置于肝浸液液体培养基，于３７℃、２００ｒ／ｍｉｎ振荡 菌，到２０００年省内布氏杆菌病得到有效控制，并且达到国家 培养４８ｈ，取 ３ｍＬ菌液置于２个 １．５ｍＬ无菌离心管中， ［３］ 颁布的布氏杆菌病“控制区”标准 ，但是２００６年该病疫情 ８０℃水浴３０ｍｉｎ，将灭活菌液按照细菌ＤＮＡ提取试剂盒说 ［４］ 呈回升状态 。虽然目前针对该病的疫苗已经存在，但是由 明操作，分装后于－２０℃冰箱保存备用。 于疫苗使用不当造成布氏杆菌感染家畜或人的事件时有发 １．３　引物合成 ［５］ 生 ，可见其保护率、安全性均很低。 参考ＧｅｎＢａｎｋ基因编码区序列，结合克隆载体ｐＭＤ１９－ 布氏杆菌外膜蛋白（ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓ）Ｏｍｐ２５／ Ｔ的阅读框，应用 Ｐｒｉｍｅｒ５．０设计羊布氏杆菌 Ｏｍｐ２５基因 Ｏｍｐ３１家族免疫原性强，可诱导免疫动物产生高滴度特异性 ＰＣＲ引物，预计其扩增目的片段长度为６４０ｂｐ。引物由生工 ［６］ 抗体，纯化蛋白可用于布鲁菌病的诊断 。由于布氏杆菌的 生物工程（上海）股份有限公司合成，具体信息见表１。 外膜蛋白（ＯＭＰｓ）暴露于Ｓ菌的表面，不仅能与ＩｇＧ抗体发生 表１　引物相关信息 反应，而且还可以引起保护性免疫反应，一直被作为研究的重 ［７］ 长度 酶切 点 。本研究采用羊种布氏杆菌３型青海省海晏县自