肺炎球菌表面蛋白的克隆表达与免疫原性研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（４）：６５～６９ 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 研究简报殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪 肺炎球菌表面蛋白的克隆表达与免疫原性研究 蔡倩影　方　亮　黄金钟　林海英　郭养浩　孟　春 （福州大学生物科学与工程学院　福州　３５０００２） 摘要　从肺炎球菌ＹＦ０５中扩增了肺炎球菌表面蛋白Ａ（ＰｓｐＡ）和肺炎球菌表面黏附素Ａ（ＰｓａＡ） 基因，以ｐＥＴ２７ｂ（＋）为载体构建了重组表达质粒的表达系统后，转化入大肠杆菌ＢＬ２１，ＩＰＴＧ诱 导表达，表达的重组蛋白约占菌体总溶解蛋白的７５％，结果显示：表达的ＰｓｐＡ蛋白和ＰｓａＡ蛋白， 分子量分别约为７５ｋＤａ和３７ｋＤａ。成功表达的重组蛋白具有较强的免疫活性和交叉免疫效果。 关键词　ＰｓｐＡ基因　ＰｓａＡ基因　免疫原　原核表达 中图分类号　Ｑ７８６ 　　肺炎球菌是细菌性肺炎、中耳炎和脑膜炎等疾病 感染的高危人群［３］。处于免疫低下状态的患者也常出 的致病菌。每年，全球范围约有 １２０万人死于肺炎球 ［４］ 现对荚膜多糖疫苗的无反应性 。目前，一些科学家 ［１］ 菌性肺炎 。由于大量耐药菌株的出现，即使使用抗 致力于肺炎球菌蛋白疫苗的研究，期望用肺炎球菌荚 菌素，肺炎球菌导致的感染仍是感染和死亡的主要原 膜多糖蛋白结合疫苗弥补肺炎球菌荚膜多糖疫苗的不 因。为了应对由抗生素滥用产生的大量耐药菌株，现 足。当前最重要的蛋白疫苗包括：肺炎球菌表面蛋白 在许多学者都关注疫苗的研制，努力改进疫苗的免疫 Ａ、肺炎球菌表面黏附素Ａ（ＰｓａＡ）和肺炎球菌溶血 效果。肺炎球菌的抗原有多种。目前普遍认为，荚膜 素等［５］。 多糖是肺炎球菌毒力的决定因素，它是第一个被发现 　　本文通过获取ＰｓｐＡ和ＰｓａＡ基因构建重组载体， 的可诱导机体产生抗体的非蛋白抗原，在细菌生长的 来进一步获取ＰｓｐＡ和ＰｓａＡ蛋白，为肺炎球菌蛋白疫 对数期荚膜快速合成。多糖抗原能在肺炎病人的血清 苗的研究提供实验依据。 和尿中检测出［２］。 １　材料与方法 　　目前，肺炎球菌２３价多糖疫苗对成年人有一定效 果。然而，荚膜多糖属于Ｔ细胞非依赖型抗原（ＴＩ），其 １．１　材　料 在体内经ＤＣ细胞降解后生成的小片断无法与组织相 １．１．１　质粒和菌种　ｐＥＴ２７ｂ（＋）质粒和大肠杆菌 容性复合体（ＭＨＣ）相结合，无法激活Ｔ细胞。因而多 ＢＬ２１。肺炎球菌 ＹＦ０１，ＹＦ０５，ＹＦ１９，ＦＹ２３，６Ｂ均由中 糖疫苗免疫效应弱，也不能促进同类抗体型别之间的 国生物制品研究所提供。 转换。初次免疫能诱导产生保护水平的抗体，但再次 １．１．２　试剂、耗材　质粒 ＤＮＡ小量纯化试剂盒、 免疫不能使降低的抗体达到初次免疫后的水平，不能 ＰｒｏｔｅｉｎＭａｒｋｅｒ购自ＴａＫａＲａ公司；限制性内切酶ＸｈｏＩ、 诱导产生免疫记忆。此外荚膜多糖只能刺激己成熟的 ＮｃｏＩ，ｄＮＴＰ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶、Ｔ４ＤＮＡ连接酶、ＩＰＴＧ（异 Ｂ细胞分化、繁殖，产生抗体。由于婴幼儿体内缺乏此 丙基硫代 Ｄ半乳糖苷）为厦门鹭隆公司产品； β 类细胞，多糖疫苗在２岁以下婴幼儿中免疫原性差，不 ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００，琼脂糖购于上海生物工程公司；碱性磷 能诱导有效的免疫保护，而该年龄段人群是肺炎球菌 酸酶标记的抗兔ＩｇＧ免疫球蛋白（二抗）购自华美生