葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达-南京农业大学学报.pdfVIP

摇 南京农业大学学报摇 2014,37(4):123-130 http:/ / 摇 Journal of NanjingAgricultural University doi:10.7685/ j.issn.1000-2030.2014.04.018 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 杨玉霞,张慧玲,汪艳,等.产琥珀酸丝状杆菌1,3-1,4-茁-葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达[J].南京农业大学学报,2014,37(4):123-130 产琥珀酸丝状杆菌1,3-1,4-茁-葡聚糖酶基因 在毕赤酵母中的表达 杨玉霞,张慧玲,汪艳,陈勇* (新疆农业大学新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室,新疆 乌鲁木齐830052) 摘要:为实现瘤胃细菌产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)1,3-1,4-茁-葡聚糖酶基因(FsGLU)的高效表达,开发新 的饲用茁-葡聚糖酶资源,根据毕赤酵母对密码子的偏爱性、G+C含量等特点,对FsGLU基因进行密码子优化,然后合成优 化后的1,3-1,4-茁-葡聚糖酶基因(FsGLUm),转化毕赤酵母 GS115,以甲醇诱导表达并对重组FsGLUm 的酶学特性、底物 特异性和对消化酶的耐受性进行了研究。 结果表明:摇瓶水平条件下,以甲醇诱导表达48 h 时,重组FsGLUm酶活性提高 -1 25郾1%(P0.05)。 在10 L发酵罐中诱导96 h后,重组FsGLUm 的活性为6 424 U·mL ,菌体湿质量和干质量达到274.6 -1 和123.6g·L 。 酶学特性分析表明:纯化后的重组FsGLUm最适反应温度为37 益,最适反应pH值为5.0,比活性为10397 -1 U·mg 。 在温度低于37 益、pH5.0~6.5 时该酶具有较好的稳定性。 底物特异性分析表明:重组FsGLUm可水解大麦 茁- 葡聚糖和地衣多糖,不降解燕麦木聚糖、桦木木聚糖和羧甲基纤维素钠。 在胃蛋白酶和胰蛋白酶共同作用60 min后,仍保 留了50.5%的酶活性。 结论:FsGLU基因在毕赤酵母GS115 中实现了高效表达,重组FsGLUm作为饲用酶制剂具有潜在的 应用价值。 关键词:产琥珀酸丝状杆菌;1,3-1,4-茁-葡聚糖酶基因;毕赤酵母;基因表达;酶学性质 中图分类号:S852.23摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2014)04-0123-08 Expression of Fibrobacter succinogenes 1,3鄄1,4鄄茁鄄glucanase gene inPichiapastoris YANG Yuxia,ZHANG Huiling,WANG Yan,CHEN Yong* (Xinjiang Key Laboratory of Herbivore Nutrition for Meat and Milk Production, Xinjiang Agricultural University,Urumqi830052,China) Abstract:Toachievehigh鄄level expressionof 1,3鄄1,4鄄茁鄄glucanasegene(FsGLU)derivedfromrum