基于taqman探针双重荧光pcr检测食品中肠道-现代食品科技.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2017, Vol.33, No.1 基于TaqMan探针双重荧光PCR检测食品中肠道 沙门氏菌和肠炎沙门氏菌 袁慕云 1 1 2 3 1 ，许龙岩 ，刘二龙 ，曹际娟 ，陈碧玲 （1.广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广东广州 510623）（2.黄埔出入境检验检疫局，广东广州 510530） （3.辽宁出入境检验检疫局，辽宁大连 116001） 摘要：建立基于 TaqMan 探针双重重实时荧光 PCR 检测肠道沙门氏菌（Salmonella enterica ，SP ）和肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis ，SE)的方法。根据 SP 的aceA 基因（GenBank：U43344.1 ）、肠炎沙门氏菌特异序列SEP （GenBank：AF370707.1 ），分别 设计引物和探针，在 aceA 探针的 5′端标记FAM 和SEP 探针的 5′端标记VIC ，建立基于TaqMan 探针双重荧光 PCR 检测方法。试验 结果，58 株 29 种不同血清型肠道沙门氏菌均扩增出 aceA 基因扩增曲线，SEP 特异性地扩增出 15 株 SE，而28 种不同血清型沙门氏 菌和 17 株变形杆菌等阴性对照株扩增结果均为阴性。aceA 和 SEP 的双重荧光PCR 扩增效率分别为 100%和 104%，R2 分别为 0.999 和 0.998，最低检测浓度分别达到280 cfu/mL 和 260 cfu/mL。建立的方法特异性好、灵敏度高，整个试验可在31 h 完成，是快速检测 SP 和 SE 的有效方法，可用于食品中 SP 和 SE 的特异性检测。 关键词：肠道沙门氏菌；肠炎沙门氏菌；TaqMan 探针；双重荧光 PCR；检测；食品 文章篇号：1673-9078(2017)1-248-252 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2017.1.038 Development of a Duplex Real-time PCR Method with TaqMan-based Probes for Detecting Salmonella enterica and Salmonella enteritidis 1 1 2 3 1 YUAN Mu-yun , XU Long-yan , LIU Er-long , CAO Ji-juan , CHEN Bi-ling (1.Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Guangzhou 510623, China) (2.Huang Pu Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Guangzhou 510530, China) (3.Liaoning Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Dalian 116001, China) Abstract: In order to detect Salmonella enterica (SP) and S