小干扰rna特异性沉默泛素特异肽酶22基因对膀胱癌细胞增殖的抑制.pdfVIP

肿瘤2011年1月第31卷第1期 Tumor Vol. 31, J anuary, 2011 17 DOI:10.3781/j .issn.1000-7431.2011.01.004 Basic Research ·基础研究 小干扰RNA特异性沉默泛素特异肽酶22基 因对膀胱癌细胞增殖的抑 制作用 吕 磊，曾甫清，唐 冬，王智宇，蒋国松，肖行远 华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科，武汉 430022 [摘要] 目的：研究小RNA干扰泛素特异肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22 ，USP 22)基因表达对膀胱癌EJ 细胞增 殖的影响。方法：设计并合成针对U SP 22基因的3条特异性小干扰RNA （small interfering RNA ，siRNA ）及阴性 siRNA ，并同时设立空白对照，然后用脂质体Translipid转染EJ 细胞。通过实时荧光定量RT-PCR 和Western 印迹法 分别检测转染前后EJ 细胞中U SP22 mRNA和蛋白表达水平，MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖率，FCM法检 测细胞周期分布。结果：3条针对U SP 22基因的特异性siRNA均能抑制U SP22 mRNA和蛋白的表达，其中U SP22- siRNA-1的沉默效率最高。转染USP22-siRNA-1 48 h后，EJ 细胞中USP22 mRNA和蛋白表达水平分别下调65%和 80% ，而且细胞增殖明显受到抑制，细胞周期被阻滞于G 期。结论：USP22特异性siRNA 能够有效沉默USP 22基因 1 表达，并显著抑制膀胱癌EJ 细胞增殖。推测USP 22基因可能成为治疗膀胱癌的一个新靶点。 [关键词]  膀胱肿瘤；泛素巯基酯酶；RNA ，小分子干扰；细胞增殖；细胞周期；泛素特异肽酶22 [中图分类号] R737.14               [文献标志码]  A            [文章编号] 1000-743 1 （20 11）0 1-00 17-05 The inhibitory effect of specific small interfering RNA against ubiquitin specific peptidase 22 gene on cell proliferation of bladder cancer cells LÜ Lei，ZENG Fu-qing，TANG Dong，WANG Zhi-yu，J IANG Guo-song，XIAO X ing-yuan Department of Urology ，Union Hospital，Tongj i Medical College，Huazhong University of Science and Technology ， W uhan 430022，China [A BST RA CT] Obj ective: To invest igate t he effect of specif ic small interfering RNA (siRNA) against ubiquitin specific peptidase 22 （USP 22）gene on the proliferation of bladder cancer cell line EJ . Methods:  T hree specific USP22 siRNAs and one negative siRNA were indiv idually transfected into EJ cells for 48 h . T he expression levels of USP22 mRNA and protein were analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR (qRT-PCR) and Western blotting, respectively . T he cell proliferation was determined by MTT assay and plate clo