盐胁迫下枣叶片蛋白质组差异研究.docVIP

盐胁迫下枣叶片蛋白质组差异研究 　　摘 要： 【目的】为了探明盐胁迫下枣蛋白表达的差异，【方法】以较耐盐碱的七月鲜枣品种的扦插苗为材料，经过临界浓度（0.60%）的钠盐（NaCl）处理，取其叶片进行蛋白质双向电泳，经ImageMaster 2D分析，【结果】结果表明，处理与对照之间总蛋白的整体分布模式非常相似，在pH 3～10和MW50～90 kD内的蛋白点分布最多，处理与对照之间量变倍数大于1.5倍的差异点有26个，其中6个蛋白受胁迫上调， 20个蛋白受胁迫下调。在上调的蛋白质点中，3个点受盐胁迫诱导增加了近4倍，2个蛋白质点相对丰度增加了2倍以上，表现出强烈的盐诱导特性。说明他们可能在枣的抗盐机制中发挥重要作用。在下调的蛋白质点中，2个点相对丰度降低至对照的5倍左右，表现出强烈的盐抑制特性，说明其可能是对盐胁迫比较敏感的2个蛋白质或多肽，并且在枣的抗盐性机制中也发挥比较重要的作用。【结论】在临界浓度钠盐胁迫下，枣叶片蛋白质表达有显著差异。 关键词： 枣； 盐胁迫； 蛋白质； 双向凝胶电泳 中图分类号：S665.1 文献标志码：A 文章编号：1009-9980？穴2013？雪01-0043-05 土壤盐渍化已经成为制约世界农业发展的重要因素，盐胁迫是影响植物生长、降低作物产量的重要因素。随着温室效应引起的全球气候变暖，使得部分地区环境持续恶化，预计到2050年全球将有超过50%的耕地会变得盐碱化[1-2]。探索植物耐盐机制，提高植物耐盐性，开展耐盐作物分子育种已成为一种有效的应对措施[3]，这对减轻人类所面临的土地资源和淡水资源短缺、粮食供需矛盾以及有效控制环境恶化都有着重要的战略意义。 枣原产我国，已有7700余年的栽培历史，较抗盐碱、耐旱、耐瘠薄。枣果实营养丰富，含糖量居各类果品之首，维生素C的含量高于柑橘10倍，高于苹果80倍，是梨的100倍。枣是我国优势果品，国外有30多个国家先后引种了我国的枣，但除韩国外均尚未形成规模化商品栽培，迄今98%的枣资源和100%的枣产品国际贸易集中在我国。目前我国的主要枣区大多是在过去不适宜耕作的山、沙、碱地区建立发展起来的。在河北、山东环渤金丝小枣产区和河南内黄扁核酸枣区历史上是著名的盐碱区，形成上千公顷的枣林带或林区，但产量较低，品质较差。近年来，我国的新疆和沿海地区，在盐碱地正探索大面积发展枣树生产。如何提高枣树的耐盐性已成为我们亟待研究的重大问题[4]。这不仅关系到提供枣产量和品质，更关系到国内外枣产品的供应，我国民族果树的振兴，关系到数百万枣农的小康生活，关系到盐碱地的综合治理与开发。 当前，关于枣树耐盐性的研究主要集中于生态学和生理生化特性研究[4]，而其耐盐性相关分子生物学研究，尤其是蛋白组学研究几乎无人涉及。研究尝试并确定了抗盐性较强的七月鲜枣叶片双向电泳体系，通过高通量的蛋白组学方法[5-6] ，分析枣耐盐胁迫反应相关蛋白，为进一步研究盐胁迫下枣叶片特异蛋白质的功能及揭示枣耐盐分子机制奠定基础。 1 材料和方法 1.1 材料 试验在中国农业科学院郑州果树研究所枣良种圃进行，试验材料为七月鲜枣当年生扦插苗。扦插苗属于同一母树上发育良好、无病虫害及机械损伤的半木质化枝条快繁而成。盆栽基质为良种圃中普通土加草炭100 g·kg-1（干质量，下同）和河沙50 g·kg-1，混匀、过筛。盆土基质含有机质0.98%、速效氮（N）0.0067%，速效磷（P）0.0033%，速效钾（K）0.0115%，pH 7.12，含盐量0.026%。栽植用塑料（PVC）盆，高33 cm，上口径40 cm，下口径33 cm，底部有排水孔，置于托盘上。每盆装基质7.12 kg（干质量）。2009年3月12日每盆栽大小基本一致的3株枣苗， 每个处理3次重复，每个重复10盆，NaCl处理浓度为： 0， 0.60%（依文献[4]试验结果设计的超临界浓度（0.60%）的钠盐，按基质干质量计），取相应量NaCl加水至1 500 mL，一次浇入，自然光照避雨状态下培养，每5 d根据土壤湿度补充等量自来水，有溶液渗出到托盘中，于2 h后返浇盆中。第25天分别采集每株苗木中部3枚成熟叶片用ddH2O冲洗干净后迅速用滤纸轻轻擦干，称质量。 1.2 蛋白质的提取与定量 枣总蛋白的提取方法参照本实验室朱志勇等[7] 已经建立的苹果蛋白质提取的方法，略有改动。切取枣叶组织，切碎成3 mm×3 mm的小块，在液氮中，用研钵磨碎成细粉状。将组织细粉转入50 mL离心管中，加入25 mL TCA/丙酮（1∶9），65 mmol·L-1 DTT，-20 ℃沉淀1 h。离心10 000 r·min-1，45 min，去除上清，沉淀加入25 mL纯丙酮，-20 ℃沉淀1 h，