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肌上皮细胞在大鼠腮腺萎缩过程中转归 　　[摘要] 目的 研究大鼠腮腺主导管结扎后萎缩腮腺内肌上皮细胞（MEC）的转归规律。方法 通过结扎大鼠右侧腮腺主导管诱导腺体萎缩，采用苏木精-伊红（HE）染色观察正常腮腺及导管结扎后1、3、5、7、14、21、30、60、100、150 d萎缩性腮腺的组织学变化，并采用免疫组织化学染色方法定量分析MEC在腮腺萎缩不同时间点的数量及分布情况。结果 组织学观察发现：腮腺主导管结扎5 d后，大部分腺泡细胞出现凋亡丧失，在腺体萎缩过程中形成大量导管样结构，间质逐渐纤维化并伴有炎性细胞浸润。免疫组织化学染色定量分析结果显示：导管结扎后5 d内，MEC数量快速增加，随后其数量增长缓慢，维持在一定的范围内，100 d时MEC数量达到峰值，其后快速减少；在腮腺萎缩早期，MEC位于腺泡及闰管表面，呈星形或梭形，随着腺体的萎缩，最终呈梭形分布于导管样结构的外层。结论 在导管结扎后5 d内，MEC出现反应性大量增殖，随后数量增长缓慢，维持在一定的范围内；随着腮腺的逐渐萎缩，100 d后MEC数量快速减少。 [关键词] 肌上皮细胞； 腮腺； 萎缩； 导管结扎 [中图分类号] R 780.2 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.01.007 由于受到头颈部肿瘤放射治疗、舍格伦综合征及唾液腺炎等因素的影响，人体大唾液腺会出现腺体萎缩和唾液分泌功能下降等现象，给患者的生理、心理带来严重的影响，但目前尚无有效的治疗手段。如何治疗唾液腺萎缩和促进腺体功能恢复已经日益引起人们的重视。在唾液腺组织成分中，肌上皮细胞（myoepithelial cell，MEC）被普遍认为是可能导致唾液腺肿瘤（包括多形性腺瘤、肌上皮瘤等）发生的潜能祖细胞之一[1]，其内含肌动蛋白，能够接受交感 及副交感神经α1-肾上腺素受体及毒蕈碱受体的协同诱导作用而发生收缩，促进腺泡及导管的分泌[2]，抑 制唾液腺的萎缩。目前对长期萎缩性腮腺内MEC病理变化的研究仍然较少。本实验通过结扎大鼠腮腺主导管[1，3]诱导腺体发生渐进性萎缩，并应用免疫组织化学方法定量测定MEC在萎缩性腮腺不同时间点的数量及分布，结合腺体的组织学变化，观察MEC在腮腺萎缩过程中的转归规律。 1 材料和方法 1.1 实验对象 成年健康的雄性SD大鼠66只，体重（300±20） g，购于山东绿叶制药有限公司。66只大鼠随机分为11组，每组6只，常规饲养。 1.2 实验方法 用质量分数3%水合氯醛行腹腔内注射麻醉，剂量为10 mL·kg-1。麻醉后将大鼠右侧腮腺嚼肌区备皮后置于无菌操作台上，消毒，于右耳前下方作长约1 cm的纵形小切口，暴露眶外泪腺；在眶外泪腺下极的中部分离出咬肌表面的腮腺主导管及伴行神经，用3—0丝线结扎腮腺主导管，缝合皮肤。术后常规饲养，分别将各组大鼠于导管结扎后第0（正常对照 组）、1、3、5、7、14、21、30、60、100、150天处死，切取右侧腮腺，放入质量分数4%的多聚甲醛固定液中固定。 1.3 组织学观察 各组动物的腮腺组织样本固定24 h后，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，然后浸蜡、包埋，制成4 μm厚切片，行苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色，置于光镜下观察腮腺的组织学变化。 1.4 免疫组织化学观察 采用特异性α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）单克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）对腮腺标本进行免疫组织化学染色，染色采 用SABC法，抗体稀释度为1∶250，DAB显色，苏木精轻度复染，观察MEC的表达情况。 1.5 MEC计数及统计分析 将免疫组织化学切片放置于Olympus BX51型（Olympus公司，日本）显微镜的高倍镜下观察。每张切片随机选择5个视野拍照，采用ImagePro Plus 6.0图像软件计数MEC的数目。实验数据采用SPSS 16.0统计软件进行分析，各组均数的比较采用单因素方差分析，检验水准为双侧α=0.05。 2 结果 2.1 大体观察结果 导管结扎1 d时，大鼠右侧腮腺的体积较正常对照组明显增大，腺小叶水肿、分界不清；3 d时，腺体体积恢复正常；7 d时，腺体体积明显减小。随着导管结扎时间的延长，腺体组织逐渐缩小，色泽加深呈灰色，质地变韧；小叶间隔增厚，并可分离缩小的腺小叶。结扎100 d时，腺体缩小明显，体积约为正常腺体的一半；150 d时，腺体组织内完全看不到腺小叶结构。 2.2 组织学观察结果 正常对照组：腮腺组织正常；覆盖在腺体表面的纤维结缔组织被膜深入腺实质，将腺体分成许多腺叶和腺小叶，腺