第十章 生物材料的预处理、液固分离及细胞破碎.ppt

一、凝聚和絮凝作用 它们主要作用于增大发酵液中悬浮粒子的体积，提高固液分离速度和滤液质量，在预处理中常用于细胞、菌体（胞外产物）、细胞碎片（胞内产物）以及蛋白质等胶体粒子。 （一）凝聚作用 凝聚作用(coagulation)是指在某些电解质作用下，使胶体粒子的扩散双电层的排斥电位降低，破坏了胶体系统的分散状态，而使胶体粒子聚集的过程。（P200） 在发酵液中加入具有相反电性的电解质： ①中和胶粒电性，降低双电层排斥力。 ②离子的水化作用，破坏胶粒的水化层。 影响凝聚作用的主要因素有无机盐的种类、化合价以及无机盐的用量等。阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为：Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+ 常用的凝聚剂有：Al2(SO4)3·18H2O、AlCl3·6H2O、FeCl3、ZnSO4、MgCO3等。 (二) 絮凝作用 絮凝剂是天然的或人工合成的有机高分子化合物，如壳聚糖、海藻酸钠、明胶及酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍生物和聚丙烯酸类等。 絮凝剂具有长链线状的结构，易溶于水，其分子量可高达数万至一千万以上，在长的链上含有相当多的活性功能团。 影响絮凝效果的因素主要有： （1）絮凝剂的分子量： （2）絮凝剂的用量： （3）溶液pH值： （4）搅拌速度和时间： 3、变性沉淀 4、等电点沉淀 5、加各种沉淀剂沉淀 6、吸附 例如四环素发酵液中加入黄血盐和硫酸锌，生成亚铁氰化锌钾 K2Zn3[Fe(CN)6]2的胶状沉淀，能将杂蛋白质和菌体等黏附在其中而除去。 二、去除杂蛋白的其他方法 （一）等电点沉淀 （二）变性沉淀 （三）加各种沉淀剂沉淀 （四）吸附 第二节 发酵液的液-固分离 一、过滤 （一）过滤方式 1、常规过滤 2、错流过滤 第三节 细胞的破碎 细菌、霉菌、酵母细胞壁的化学组成： 细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，它是难溶性的多聚物，由N-乙酰葡萄糖胺、 N-乙酰胞壁酸和短肽聚合而成的多层网状结构。 霉菌的细胞壁较厚，约100~250nm，主要由多糖组成，其次还含有少量蛋白质和脂类。 酵母的细胞壁幼龄时较薄，具有弹性，以后逐渐变厚。 了解细胞壁结构对选择细胞破碎方法有着十分重要的意义。 微生物细胞壁的强度和细胞破碎的难易程度由细胞壁的化学组成可知微生物细胞壁都是由网状的高分子聚合物构成，其强度取决于网状结构的交联程度，交联度大，网结构紧密，强度就高。 第十章 生物材料的预处理、液固分离 及细胞破碎 第一节 生物材料的预处理 1、含量低 如胰岛素在胰脏中的含量为0.02%，胆汁中胆红素含量为0.05~0.08% 2、杂质多 3、易变性失活 选择预处理方法的依据 1、生物活性物质来源、存在状态 “胞内” 、“胞外”、前体 2、后续工艺要求 3、稳定性 可被材料中酶、微生物破坏，还可能受酸、碱、盐、重金属离子、机械搅拌、温度、甚至空气和光线作用改变活性。 三、酶解法去除不溶性多糖 可用酶转化为单糖 黏多糖可与一些阳离子表面活性剂如十六烷基溴化铵（CTAB）生成沉淀去除。 四、高价金属离子的去除 1、离子交换法 2、沉淀法 Ca2+ 草酸 Mg2+ 磷酸盐,三聚磷酸钠 Fe3+ 黄血盐 （二）、过滤设备 1、板框过滤机 2、真空鼓式过滤机 （三）过滤介质和助滤剂 1、过滤介质：滤布或膜 2、助滤剂：要求为惰性物质、无毒、有一定细毒及硬度，成本低廉。 常用有：硅藻土、纸浆、石棉、纤维素等 二、离心分离 1、过滤式离心机 2、沉降式离心机 3、管式离心机 三、影响液-固分离的因素 （一）微生物种类对液固分离影响 （二）发酵液的黏度 （三）其他因素 pH、温度、加热时间 一、机械法 1、匀浆法 2、珠磨法 3、超声波 三、化学法 1、化学试剂处理 2、酶解法 3、制成丙酮粉 二、物理法 1、干燥 2、冻融 3、渗透压冲击 一、机械法 （一）高压匀浆器 （高压剪切破碎） （二）高速珠磨机 （三）超声波振荡器 二、物理法 （一）干燥法 空气干燥、真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥 （二）冻融法 （三）渗透压冲击法 先把细胞放在高渗溶液中，细胞发生收缩，然后将介质快速稀释或将细胞转入水或缓冲液中，细胞快速膨胀，使产物释放至溶液中 三、化学法 （一）、加入化学试剂 1、用碱处理 2、用脂溶性有机溶剂 3、表面活性剂 （