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37℃下不同稀释液对鸡精子活率影响 　　摘要：配制了pH、渗透压接近的3种精液稀释液，37 ℃下每隔2 h测定鸡精子活率，直到全部精子死亡为止，计算精子存活时间和生存指数。结果表明，鸡精子在B稀释液中存活时间极显著高于A稀释液和C稀释液（P0.05）。鸡精子在A、B、C 3种稀释液中存活时间分别为（12.6±0.5） h、（14.0±0.3） h和（12.1±0.8） h，生存指数依次为5.7±0.6、6.6±1.7、2.9±0.8， 在A稀释液和B稀释液中生存指数极显著高于C稀释液（P0.05）。 关键词：鸡精子；稀释液；渗透压；存活时间 中图分类号：S831；S814.3 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2013）07-0012-03 目前在生产上常用的鸡精液稀释液有1%NaCl溶液，5%～7%葡萄糖溶液和葡萄糖卵黄溶液等，但实践应用效果不理想。精液稀释液各项指标是影响精子存活时间和生存指数的重要因素，尤其是稀释液的pH值、渗透压对精子生存指数的影响很大。尽管大量研究者对鸡精液稀释液的研究取得了很大进展，但如何根据鸡精子在体外生理特点和变化规律，研制出配方简单、价格低廉，易于推广应用的常温、低温、冷冻的家禽精液稀释液，还有待进一步的研究。陈元明等[1]研究认为鸡精子在2～5 ℃条件下可存活10 d，而在30 ℃以上则只能存活数小时。本试验制备了3种稀释液，将采集的鸡新鲜精液进行稀释后，37 ℃下每隔2 h观察一次精子活率，测定精子存活时间、生存指数等指标，以期了解提高温度后稀释液对鸡精液保存效果的影响。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试验用鸡 30只14月龄蛋用型罗曼种公鸡为青海省畜牧兽医职业技术学院养禽示范园饲养。 1.1.2 试剂 葡萄糖、果糖、氯化镁、谷氨酸钠、醋酸钠、柠檬酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、EDTA-Na2、N-三（羟甲基）甲基-2-氨基乙烷磺酸（TES）、超纯水等。 1.1.3 仪器 精子质量评定系统、电子分析天平、渗透压仪、贝克曼温度计、数字pH计、普通温度计、显微镜、数显恒温水浴锅、集精杯等。 1.2 方法 1.2.1 稀释液的制备 鸡精液稀释液配方见表1，按配方准确称取所用试剂，溶解定容后用定性滤纸过滤，分装在250 mL瓶中，100 ℃高温高压灭菌15 min，室温冷却后蜡封，阴凉处保存备用。 1.2.3 精液的稀释与保存 供试精液来自30只蛋用型罗曼种公鸡，公鸡经采精训练，采用背腹联合按摩法采集精液，并进行品质评定。将无粪尿污染精液混合，当活率大于0.6时供稀释保存之用。将采集的混合鲜精液与各稀释液按精液∶稀释液（V/V）1∶4等温稀释，分装于洁净的青霉素空瓶中，加盖后放入37 ℃恒温水浴锅中，保存观察。 1.2.4 测定指标与方法 精子活率每隔2 h观察一次，检测时间与结果记入专用表格，直到全部精子死亡为止，最后计算精子存活时间和生存指数。过程中始终注意保存温度的恒定与无菌操作，试验重复4次。 1.2.5 渗透压及pH的测定 采用冰点下降法测定各稀释液的冰点下降度（Δt），按Δt/1.86×1 000换算为渗透摩尔浓度；使用PHS-2型酸度计测定各稀释液的pH。 1.2.6 数据处理 4次试验结果取平均值，计算每组数据的标准误，并进行了方差分析。 2 结果与分析 3种稀释液渗透压和pH测定结果见表2。 3种稀释液37℃下保存精液时精子存活时间与生存指数见表3，生存指数是指相邻两次精子活率均数与间隔时间乘积的总和。鸡精子在B稀释液中存活时间极显著高于A稀释液和C稀释液（P0.05）。鸡精子在A、B、C 3种稀释液中存活时间分别为（12.6±0.5）h、（14.0±0.3）h和（12.1±0.8）h，生存指数依次为5.7±0.6、6.6±1.7、2.9±0.8， 在A稀释液和B稀释液中生存指数极显著高于C稀释液（P0.05）。 3 小结与讨论 3.1 释液液组成对精子保存的影响 稀释液保存效果与稀释液组成有着密切的关系。本试验保存效果较好的A稀释液和B稀释液选择果糖、谷氨酸钠、氯化镁、柠檬酸钾等，在家禽稀释液中添加果糖效果要优于葡萄糖，并证实精子分解果糖速度较缓慢。张兆旺[2]研究结果显示，果糖稀释液中精子生存指数、存活时间和畸形率均优于蔗糖，葡萄糖效果最差。苏东顿等[3]也认为果糖是提高贮存精液受精能力的重要成分之一。 Harrison[4]研究认为谷氨酸盐能延长鸡体外精子寿命。张兆旺[5]认为谷氨酸钠对精子有保护作用，并指出谷氨酸钠在单独配制稀释液时以每100 mL含2.40～2.47 g为宜。张兆旺等[6]报道表明在葡萄糖-磷酸盐类鸡精液稀