过表达人工设计的sRNA（anti-micA）提高大肠杆菌存活力和普鲁兰酶产量.pdfVIP

第34卷第 1期 生 物 学 杂 志 Vo1．34 No．1 2017年 2月 JOURNAL0FBIOLOGY Feb，2017 doi：10．3969／j．issn．2095—1736．2017．01．016 过表达人工设计的 sRNA(anti—micA) 提高大肠杆菌存活力和普鲁兰酶产量 安展飞 ，栗亚美 ，杨艳坤 ，白仲虎 ， (1．江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室．无锡 214122； 2．江南大学 生物工程学院，无锡 214122) 摘 要 大肠杆菌表达外源蛋白的过程 中会受到各种外源和内源的胁迫并且形成了多种感受和响应特定刺激的胁 迫信号传导系统。细茵胁迫应激时，许多小的非编码RNA(smallnon—codingRNA，sRNA)参与 mRNA转录后调节。 改变其翻译效率和稳定性，调节基 因表达。通过过表达人工设计的micA反义 sRNAanti—micA(6prD和0mU)阻断 miAc对 ompA的沉默，进而阻断sigmaE介导的细胞 自溶信号转导途径，提高大肠杆菌存活力和表达普鲁兰酶能力． 并初步讨论了影响人工设计反式编码 sRNA功能的影响因素。研究发现 ，在 bpr0和omU过表达菌株中，茵落形成 单位分别提高了0．5和 1个数量级，ompAmRNA相对水平分别提 高了7．2和 6．9倍 ，OmpA蛋 白含量均显著提 高， 普鲁兰酶产量分别提高了1．4和 1．8倍 ，并且omU的过表达比6prD的过表达对茵体特性的影响更大。为菌种改良 提供了一种新的方法，并为反式编码 sRNA的设计提供参考性指导。 关键词 胁迫应激；人工设计 sRNA；存活力；细胞 自溶；普鲁兰酶 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 2095—1736(2017)01—0016—07 oVerexpressi0nofartificialsRNA anti—micA enhancingEscherichiacoli viabilityandpullulanaseproduction AN Zhan—fei，，LIYa—mei，YANG Yan。kun，，BAIZhong。hu (1．NationalEngineeringLaboratoryforCerealFermentationTechnology； 2．SchoolofBiotechnology，JiangnanUniversity，Wuxi214122，China) Abstract L~cherichiacoliisfrequently influencedbyvariousstressesintheprocessofexogenousproteinexpressionandestablished variousstresssignalingsystemsthatsensingandrespondingtospecificstimuli．Recentlyithasbeenidentifiedthatmanysmallnon—cod— ingRNAs(sRNA)haveanimportantroleinregulatingmRNAtranslationbyinfluencingthestabilityandtranslationefficiencyof mRNA．Inthisresearch，inordertoblocksigmaE—mediatedcelllysissignalpathway，westudiedtheeffectofoverexpressinganti—mi— AcsonthetoleranceofE．colitoethanol，pullulanaseproductionandthetrans—codedRNA interf