稀土离子(La3+、Ce3+、Nd3+)对超氧化物歧化酶活性影响.docVIP

稀土离子(La3+、Ce3+、Nd3+)对超氧化物歧化酶活性影响 　　摘要：利用微量邻苯三酚自氧化法（320 nm）研究了25 ℃下，0.1 mol/L Tris-HCl缓冲体系中（pH 8.2）不同稀土离子（La3+、Ce3+、Nd3+）对邻苯三酚自氧化和铜锌超氧化物歧化酶（Cu， Zn-SOD）活性的影响，并对可能的抑制作用机理进行了讨论。结果表明，稀土离子La3+、Nd3+对邻苯三酚自氧化有抑制作用，Ce3+对邻苯三酚自氧化表现出先抑制后促进的作用；3种稀土离子对Cu，Zn-SOD酶活性均存在抑制作用，并随稀土离子浓度的增加抑制程度不断增强，而当加入的稀土离子浓度大于2.22×10-5 mol/L时，Cu，Zn-SOD完全失活。 关键词：铜锌超氧化物歧化酶；稀土离子；邻苯三酚；活性 中图分类号：O614.33；Q55 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）13-3145-05 铜锌超氧化物歧化酶（Cu，Zn-SOD）是一类广泛存在于生物体内的金属酶，能够催化超氧阴离子自由基（·O2-）发生歧化反应，清除生物体内超氧阴离子自由基[1]，具有抗衰老、抗癌、防白内障等作用，在生命体的自我保护系统中起着极为重要的作用[2]。 稀土元素有“农业维生素”之称，自20世纪80年代以来，稀土作为微量元素肥料已被广泛应用于农业生产。大量研究表明，稀土对提高作物产量，改善作物品质都起到了积极作用[3，4]。关于稀土元素对生物体内超氧化物歧化酶活性的影响研究广泛，有报道认为，稀土元素对提高植物的超氧化物歧化酶活性以及降低脂质过氧化产物丙二醛的含量有十分重要的作用[5]；另有报道认为稀土离子对生物体内超氧化物歧化酶活性影响不大[6]。因此，弄清稀土元素与超氧化物歧化酶的相互作用，将直接证明稀土元素对生物体的保护及刺激作用，从而明确稀土元素对提高作物产量、改善作物品质的机理，并有希望将稀土化合物开发为清除超氧阴离子自由基的药物。 本研究利用邻苯三酚在碱性条件下自氧化生成超氧阴离子自由基的性质，来分析和探讨稀土离子和超氧化物歧化酶在纯化学条件下的相互作用。邻苯三酚在碱性条件下可发生链式反应生成超氧阴离子自由基，并受抗氧化酶的抑制，尽管与生物体内的生化反应尚有很大差别，但可为明确稀土在生物内对抗氧化酶的作用机制提供一定参考依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 主要仪器 SP-1920UV系列双光束紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），pHS-3E型数字酸度计（上海雷磁分析仪器有限公司），BSA124S型电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司），SYP-Ⅱ型恒温水槽（南京桑力电子设备有限公司）。 1.1.2 试剂 牛血Cu， Zn-SOD（3 000 U/mg，Fluka），三羟甲基氨基甲烷（99.9%，上海源聚生物科技有限公司），盐酸（开封东大化工有限公司），邻苯三酚（贵州遵义佳宏化工有限责任公司），氯化镧、氯化亚铈、氯化钕（国药集团化学试剂有限公司），除标注外其他试剂均为分析纯试剂，水为二次蒸馏水。 1.2 试验方法 1.2.1 邻苯三酚自氧化测定 准确量取4.50 mL浓度为 0.1 mol/L的Tris-HCl缓冲液（pH 8.2） 和4.20 mL蒸馏水，混匀后立即加入在25 ℃下恒温20 min的2.5 mmol/L邻苯三酚0.30 mL（对照管用0.01 mol/L的盐酸溶液代替），立即混匀，迅速倒入比色池中，在波长为320 nm下采用紫外可见分光法对邻苯三酚自氧化产物进行扫描，扫描间隔为1 s，记录该扫描曲线初始阶段斜率即为邻苯三酚的自氧化速率△A/min，每次试验均重复3次。 1.2.2 稀土离子对邻苯三酚自氧化的影响 测定稀土离子对邻苯三酚影响时同“1.2.1”，只是在加入邻苯三酚前，分别先加入一定量的稀土离子，并减少同体积的二次蒸馏水的量，记录在320 nm处吸光度（A）随时间（t）的变化曲线，并求取曲线斜率。 1.2.3 邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性 超氧化物歧化酶活性测定法同“1.2.1”，加入邻苯三酚前先加入一定量超氧化物歧化酶（4 μg/mL），并减少同体积二次蒸馏水，记录该曲线的斜率。 1.2.4 稀土离子对超氧化物歧化酶活性的影响 测定稀土离子对超氧化物歧化酶活性的影响同“1.2.1”，在加入邻苯三酚之前，先加一定量的超氧化物歧化酶和一定量的稀土离子，并减少同体积二次蒸馏水。记录在320 nm处吸光度（A）随时间（t）的变化曲线，并求取曲线斜率。 2 结果与分析 2.1 邻苯三酚自氧化中最大吸收波长的确定 邻苯三酚自氧化产物在特定波长处有灵敏吸收峰，但在具体应