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苦瓜黄酮类化合物提取条件优化 　　摘要：以蒸馏水为浸提溶剂，采用热浸提法从苦瓜（Momordica charantia）中提取黄酮类化合物。在单因素试验的基础上，设计正交试验优化苦瓜中黄酮类化合物的提取条件。结果表明，料水质量比对苦瓜黄酮类化合物提取量的影响最大，其次是浸提温度，浸提时间的影响最小。优化的提取方案为浸提温度90 ℃、料水质量比1∶20、浸提时间4 h，所得苦瓜黄酮类化合物提取量为1.937 mg/g。 关键词：苦瓜（Momordica charantia）；黄酮类化合物；提取；优化 中图分类号：S642.5；R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）15-3654-03 苦瓜（Momordica charantia）又称凉瓜、锦荔枝，是葫芦科苦瓜属一年生攀援草本植物，在我国各地均有种植[1]。苦瓜果实性寒味苦，营养成分丰富，含有苦瓜多糖、苦瓜素和多种氨基酸等生理活性物质，具有极高的药用和食用价值，在医药和食品领域中有着广泛的用途[2，3]。现代科学研究表明，苦瓜中的有效成分可抑制正常细胞的癌变和促进突变细胞的恢复过程，具有抗癌作用[4]。黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物。到目前为止已发现的黄酮类化合物超过5 000种。该类化合物对冠心病、心绞痛、高血脂、心血管疾病有很好的疗效，且具有防治高血压、血管硬化以及抗自由基、降低血清胆固醇等作用[5]。 由于提取工艺的优劣直接关系到药用植物中有效成分的收率、后加工的难易程度以及生产成本的高低，本试验旨在通过对苦瓜中黄酮类化合物的提取工艺进行研究，为开发利用苦瓜中的黄酮类化合物提供技术支持。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 鲜苦瓜来源于华中农业大学园艺林学学院试验基地，清洗干净后去子去瓤，切片后自然晒干，粉碎过40目筛，得苦瓜干粉备用。 试验所用试剂包括芦丁标准品（纯度98%）；甲醇和氯化铝（AlCl3）为国产分析纯。 主要仪器包括752N型紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、HH-2K1型单孔智能水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）、FA1004型电子天平（上海越平科学仪器有限公司）。 1.2 试验方法 1.2.1 芦丁标准曲线的绘制 精确称取0.01 g干燥至恒重的芦丁标准品置于10 mL干燥的容量瓶中，加无水甲醇定容至刻度，摇匀即得浓度为1 mg/mL的芦丁标准品溶液。分别吸取芦丁标准溶液0.05、0.10、0.20、0.25、0.30 mL于10 mL容量瓶中，加10 g/L AlCl3溶液9.5 mL，再加入纯水定容至刻度，摇匀静置。10 min后在420 nm处测吸光度，以芦丁浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线如图1，芦丁浓度在5～30 μg/mL范围内与吸光度有良好的线性关系，回归方程为y=0.021 6x-0.004 3，R2=0.998 6。 1.2.2 苦瓜黄酮类化合物的提取 以蒸馏水为浸提溶剂，采用热浸提法提取苦瓜中的黄酮类化合物。称取苦瓜干粉2 g，加入一定质量的蒸馏水，在90 ℃浸提6 h，浸提液用纱布过滤，滤液用蒸馏水定容至100 mL，测定其中黄酮类化合物的浓度，计算苦瓜黄酮类化合物的提取量。 黄酮类化合物提取量=提取液中黄酮类化合物浓度×提取液体积/苦瓜干粉质量 1.2.3 苦瓜黄酮类化合物提取条件的优化 设置单因素试验，分别考察料水质量比、浸提温度、浸提时间对苦瓜黄酮类化合物提取量的影响。①料水质量比。浸提温度90 ℃、浸提时间6 h，料水质量比分别为1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50。②浸提时间。浸提温度90 ℃、料水质量比1∶30，浸提时间分别为2、3、4、5、6 h。③浸提温度。浸提时间6 h、料水质量比1∶30，浸提温度分别为20、40、60、80、100 ℃。各处理均设置3组重复，结果取平均值。 由于单因素试验并不能反映各因素之间的相互作用，而实际操作中各因素之间的相互作用也会影响黄酮类化合物的提取率，因此为确定提取苦瓜中黄酮类化合物的最佳工艺参数，根据单因素试验结果确定正交试验各因素的考察水平，进一步优化苦瓜黄酮类化合物的提取工艺[6-9]。 2 结果与分析 2.1 单因素试验结果 2.1.1 料水质量比对苦瓜黄酮类化合物提取的影响 在浸提时间6 h、浸提温度90 ℃的条件下，不同料水质量比对苦瓜中黄酮类化合物提取的影响见图2。由图2可知，黄酮类化合物的提取量随提取溶剂用量的增加先呈上升趋势，料水质量比小于1∶30后再增加提取溶剂的用量，黄酮类化合物的提取量略有下降。一般来说，在一定范围内增大提取溶剂的用量有利于溶质的溶出，但过大的料水