赖氨酸超小纳米粒的制备及胶质瘤细胞荧光成像.pdfVIP

宋小杰 等 ：赖氨酸超小纳米粒的制备及胶质瘤细胞荧光成像 文章编号 ：1001—9731(2017)01—01089—06 赖氨酸超小纳米粒 的制备及胶质瘤细胞荧光成像 宋小杰 ，廖 瀚 ，王 冰 ，王艳妨 一，张 英 (1．中国科学院大连化学物理研究所生物技术部 ，辽宁 大连 116023；2．中国科学院大学 ，北京 100049) 摘 要 ： 利用N一芴甲氧羰基一L一赖氨酸分子接枝异硫氰基 荧光素 ，合成赖氨酸一荧光素小分子 ，在反相微乳液 中 京尼平作为交联剂交联赖氨酸一荧光素分子制备超小纳米粒。所得纳米粒纯化后进行紫外一近红外可见光扫描分 析 ，确定荧光素交联到纳米粒上及 未反应 小分子被 完全洗脱。动态光散射考察所得纳米粒径为 (198．33± O．03)rim、透射电子显微镜观察到纳米粒呈球形 ，平均粒径为39．78nm。荧光光谱表征所得纳米粒与荧光素荧光 光谱完全吻合 。利用胶质瘤 U87细胞进行纳米粒荧光成像 ，细胞被染色。利用CHO细胞考察纳米粒 的毒性 ，在 一 定浓度下 (小于8mg／mL)纳米粒对细胞无明显毒副作用。 关键词 ： 赖氨酸 ；反相微乳液法 ；超小纳米粒 ；荧光成像 ；细胞毒性 中图分类号： R318；Q813 文献标识码 ：A DOI：lO．3969／j．issn．1001—9731．2017．01．014 纳米粒因具有尺寸效应 、较大的比表面积、表面可 0 引 言 修饰及增强阻滞渗透效应 (EPR)在肿瘤聚集等优势而 胶质瘤是最常见 的原发颅 内肿瘤 ，发病率约为 被广泛研究。粒子尺寸和粒径分布是其最重要的一项 5／100000，约 占中枢神经系统肿瘤 的31 ，其 中超过 性质 ，决定纳米粒体 内分布 、去 向、毒性和靶 向稳定 5O 是恶性胶质瘤 ]。在现有治疗手段下 ，初次确诊 性Ⅲ9]。据报道血液循环 中，直径150nm 的颗粒容易 患者存活期为 5～8个月 ，复发患者存活期为 3～9个 被网状 内皮系统吞噬，小于 20nm则容 易被 肾脏滤 月_3]。目前胶质瘤多采用以手术为主，术后加以放疗、 过_】。目前应用于生物领域的纳米粒多为 100nm，但 化疗等辅助治疗 的方法 ，手术切除率直接关系到患者 是为 了深入渗透肿瘤提高治疗效果 ，制备 10～30nm 预后 ，影响放化疗效果及患者术后生活_4]。因此如何 的纳米粒是有必要 的[1。用于制备小尺寸纳米粒 的 彻底切除肿瘤 同时又尽最大可能保留脑功能区具有重 材料主要有金 、银、硅 、碳 、硒、锌 、铬及金属氧化物 ，通 要意义 ，而肿瘤精确定位是手术成功的前提和保障 ]。 过化学还原法 、电沉积法、原子层沉积技术及溶胶一凝 实时荧光成像是近年来发展起来 的一项判断肿瘤 胶技术制备[1。而以聚合物高分子等软质材料制备 边界的技术，通过荧光染色，特定激发波长激发照射使 小尺寸纳米粒鲜有报道 ，这是 由于软质材料易坍塌 、易 肿瘤组织发光 ，以区分肿瘤组织与正常组织 ，彻底切除 聚集 ，尺寸难控制、分布不均一[1。目前 已有利用反 肿瘤 同时又尽最大可能保留脑功能区_6]。用于术 中荧 相微乳液法京尼平交联壳聚糖制备超小纳米粒 的报 光成像 的有 5一氨基丙酮戊酸 (5一ALA)、金丝桃素、吲哚 道 [1 ]，但是鲜有生物学应用 ，作者尝试 以反相微乳液 菁绿 (ICG)及荧光素钠 (FLS)。5一ALA在胶质瘤尤其 法为模板，京尼平交联不同伯氨基化合物制备纳米粒， 是高级别胶质瘤聚集生成原卟啉 (PpIX)被广泛研究， 其 中赖氨酸不仅可利用此方法制备纳米粒 ，且 由于赖 但是在低级别胶质瘤及肿瘤 的侵袭区域易出现假 阴 氨酸有两个伯氨基可被 N一芴 甲氧羰基保护温和条件 性 ，在水肿 区及炎性组织中出现假 阳性 ；且必须装备氙 下切除。所以本文 以赖氨酸分子为骨架材料 ，从头合 灯光源的特殊手术显微镜 ，限