提出了单链断裂模型.PPT

无LTR的逆转录转座子 　　无LTR的逆转录转座子还可被称作长分散元件(LINEs)，或靶序列引物(target-primed, TP) 逆转录转座子，其特点是两端无LTR，通过靶序列引物机制进行转座。 逆转录转座子的生物学意义 　　逆转录转座子广泛分布于真核生物基因组中，对基因组功能有重要影响。 1 对基因表达的影响 　　 　　逆转录转座子对宿主基因表达的影响与其整合的部位有关，当插入基因的编码序列和启动子序列时，即造成基因失活。插入基因3-和5-非翻译区或内含子时，影响基因的转录、转录后加工或翻译过程，有时还会影响基因表达的组织特异性和发育阶段性。逆转录转座子如果插入到基因上游的调控区，如启动子和增强子区，则可使邻近的沉默基因得到表达。 2 逆转录转座子介导基因的重排 　　分散在真核生物基因组中的大量逆转录转座子是基因组的不稳定因素，它们能引起基因组序列的删除、扩增、倒位、移位及断裂等重排。由逆转录转座子引起的基因重排主要有3种方式：① 逆转录转座子可提供同源序列促进同源重组。② 逆转录转座子经逆转录作用插入新的位点。③ 逆转录转座子编码的反式因子引起基因重排。 　　逆转录转座子除能促进基因组的流动，有利于生物遗传的多样性外，它们分散在基因组中成为进化的种子，当遇到合适的基因组序列环境，即可通过突变形成新基因，或编码蛋白质某种结构域的基因，或与先存的基因互配成为新的调节因子。 1 非复制型转座 　非复制型转座(non-replicative transposition) 又被称作简单转座(simple transposition) ， 只是将转座子从供体剪切下来，再插入到受体的靶位点上去。转座完成后，受体分子会增加一个靶位点，但供体分子上会有一个缺口，如果不进行及时的修补，将造成供体的严重损伤，甚至可以可以造成细胞死亡。利用此机制的转座子包括原核生物的IS元件，细菌的噬菌体Mu，真核生物的Ac/Ds转座系统和DDE转座子等。 转座的分子机制 转座酶在转座子两端的特有序列各产生一个单链切口，并在受体位点错位切割DNA双链。 连接转座子和受体DNA的末端。 经过拆分和修补合成，即可将转座子从供体转移到受体，连接产物的拆分与DNA重组过程中Holliday连接的拆分类似。 2 复制型转座 　　复制型转座(replicative transposition)是将供体的转座元件复制一份，插入到受体的靶位点。每转座一次，转座元件的拷贝数就增加一个。复制型转座又可分作两类，一类不需要RNA中间物，另一类需要RNA中间物。 2.1 不需要RNA中间物的复制型转座 　　使用此途径进行复制的转座子有IS91和Helitron。 具体步骤如图6-25a所示。① 转座酶切开转座子起点处的一条链，酶的Tyr-OH与切口的5-磷酸基以酯键连接，切口的另一侧为游离的3-OH。② 以3- OH作为引物，开始链取代合成。③ 链取代合成达到转座子的终点，转座酶在终点处切开同一条链，游离出单链转座子。④ 新合成DNA链的3-OH亲核进攻转座子终点5-磷酸基与酪氨酸形成的酯键，形成磷酸二酯键，并释放出转座酶。⑤ 转座酶在受体分子的靶位点上切开DNA的一条链，酶与5-磷酸基形成酯键，并释放出游离的3- OH。⑥ 被游离出来的单链转座子用3-OH亲核进攻靶位点上5-磷酸基与酶形成的酯键，同时，受体分子靶位点上的3-OH也亲核进攻单链转座子上5-磷酸基与酶形成的酯键，将单链转座子插入到靶位点。随后，在靶位点的另一条链上进行DNA的修复合成，生成转座子的互补链。 2 需要RNA中间物的复制型转座 　　逆转录转座子都需要RNA中间物，但LTR逆转录转座子和无LTR逆转录转座子在转座的具体步骤上有很大的差别。 　　LTR逆转录转座子进行转座时，形成cDNA的过程与逆转录病毒合成cDNA相同，双链cDNA通过剪切-黏接转座插入靶序列，其过程与非复制型转座相似。 　　无LTR逆转录转座子的转座过程较复杂，以LINE为例，转座的基本过程如图6-26所示。① 在RNA pol II的催化下，由LINE-DNA转录生成LINE-mRNA。② LINE-mRNA进入细胞质，翻译生成逆转录酶和内切核酸酶。③ LINE-mRNA与翻译产物一起返回细胞核，结合到受体DNA富含T的靶位点，复合体中的内切核酸酶在靶位点切开DNA的一条链，产生3-OH和5-磷酸基，并形成RNA-DNA杂合分子短片段。④ 逆转录酶在靶位点的3-OH上，以LINE-mRNA为模板，起动逆转录，开始合成cDNA的第一条链。⑤ 靶位点上的第二条链被内切酶或宿主细胞内的核酸酶