实验二通课2012-3-2.ppt

2. 咽喉部细菌的检查（每班2个平皿） 取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次； 盖上平皿盖，置37℃温箱中倒置培养24h后取出观察结果。 细菌在自然界的分布 体表细菌的检查 方法：取一普通平皿培养基， 一部分写上“前”，另一部分 写上“后”，然后将手指在写 有“前”的部分沾一下，再将 手指用酒精进行消毒，在写 有“后”的部分沾一下。放入 37℃温箱培养24小时后观察。 （每个实验室4个平皿） 高压蒸汽灭菌法 注意事项： 锅内物品不宜过紧。 注意排出冷气，否则气压表虽已达15磅，温度 达不到121.3℃，不能保证灭菌效果。 灭菌后排气不能过急，以免容器内液体外溢或 引起破裂。 不耐高热高压之物品，不能用此法。 紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。 紫外线中波长为200-300nm者具有杀菌能力，其中265-266nm的杀菌作用最强。 杀菌机制：引起DNA链上相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰DNA的复制和转录，导致细菌死亡。 紫外线对细菌的影响 紫外线对细菌的影响（每个实验室1个培养皿） 取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，打开一半平皿盖，置于紫外灯下照射30分钟，然后盖好平皿，置37℃培养24h后取出观察结果。 密涂接种 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物， 称为化学消毒剂； 浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂； 只能外用，对细菌的敏感性不同。 化学消毒剂对细菌的影响 化学消毒剂对细菌的影响 方法：取一普通平皿培养基， 一部分写上“前”，另一部分 写上“后”，然后将手指在写 有“前”的部分沾一下，再将 手指用酒精进行消毒，在写 有“后”的部分沾一下。放入 37℃温箱培养24小时后观察。 （每个实验室4个平皿） 实验二通课 鲎试验（两人一支） 肠道致病菌分离培养—— S-S培养基8个/室 为避免分离不到细菌，每个实验室用4个S-S培养基接种大肠杆菌，另外4个接种粪便。 细菌的分布与消毒灭菌 1. 空气、咽喉部、手指、紫外线 (其中血平板2个/室，普通平板6个/室) 空气1个、咽喉2个、紫外线1或2个、手指3或4个 手指消毒：肥皂洗手、碘酒、酒精 2.高压蒸气灭菌法（两个实验室一台高压锅） 第二天观察结果 本次试验不写试验报告，下周一起写肠道杆菌的分离鉴定依据和结果 预习下周内容：肠道杆菌的鉴定、药敏实验 * 内 容 提 要 一. 内毒素（LPS）的检测 二. 肠道致病菌的分离培养 三. 细菌的分布与消毒灭菌 家兔发热法 烦琐、灵敏度不高 ?鲎试验法 操作简便、灵敏度高，可检测小于10ng/ml 的内毒素。 一、内毒素（LPS）的检测（1.5学时） 甲醛处理不形成类毒素 强,可刺激机体产生抗毒素,可被制成类毒素 抗原性 较弱,毒性效应大致相同 强,有选择性,引起特殊表现 毒性 160 ℃,2-4h被破坏 60-80 ℃,30min被破坏 稳定性 脂多糖 蛋白质 化学成分 为细胞壁成分,菌体崩解 活菌分泌,少数为菌体崩解 存在部分 G-菌 G+菌,及部分G-菌 来源 内毒素 外毒素 区别要点 目 的 掌握内毒素检测的方法及临床意义。 临床意义 1.检测输液用品或生物制品中是否含有 内毒素。 2.检测患者是否有革兰氏阴性菌感染引起的内毒素血症（内毒素休克）等。 原 理 鲎（hòu）是一种海洋节肢动物，其血液中含有一种有核变形细胞，这种细胞的胞浆中含有凝固酶原和凝固蛋白原。 内毒素（LPS） 　激 活 凝固蛋白原 凝固蛋白 （溶解状态） （凝胶状态） 凝固酶原 凝固酶 材 料 鲎试剂 鲎试剂溶解水 内毒素试剂 无菌注射器 方法及结果 方法： 1.取两支鲎试剂打开，分别加入0.1ml 鲎试剂溶解水， 振摇使之完全溶解。 2.其中一支加入0.1ml内毒素，标记为实验组， 另一支加入0.1ml溶解水，标记为对照组。 3.垂直放入37℃温箱，20--30分钟观察结果。 结果： 实验组出现凝固，对照组不出现凝固 二. 肠道致病菌的分离培养（1.5学时） 病原菌的检验程序 增菌培养 革兰染色 分离培养 接种琼脂斜面纯培养 采集标本 生化试验 血清学试验 动物试验 分析鉴定 革兰染色