差示扫描量热法分析光滑鳖甲抗冻蛋白apafp914txt-生物技术通报.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 9 :210-217 差示扫描量热法分析光滑鳖甲抗冻蛋白 ApAFP914 TXT 基序对抗冻活性的影响 杜荣俸  刘忠渊  毛新芳 （新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046） 摘 要 ： 研究光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 及其突变体的原核表达及活性，推测TXT 基序的突变对昆虫抗冻蛋白抗冻活性 的影响。通过定点突变新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白apafp914 基因TXT 基序的规则位点个数，并亚克隆至pET32a 原核表达载体， 转化大肠杆菌，Ni-NTA 纯化得到融合蛋白TrxA-ApAFP914 及3 种突变体蛋白 ；利用SwisS-Model 服务器预测分析了ApAFP914 蛋 白的三维结构；通过差示扫描量热法测定TrxA-ApAFP914 及其突变体的热滞活性。结果显示，4 种融合蛋白分子量均在30 kD 左右； 且突变蛋白TrxA-A19T 具有最高的热滞活性，而突变体TrxA-T33F 和TrxA-T3345F 的热滞活性显著低于未突变的TrxA-914。研究 结果表明昆虫抗冻蛋白的TXT 基序越规则其具有的热滞活性越高。 关键词 ： 光滑鳖甲抗冻蛋白 ；TXT 基序 ；差示扫描量热法 （DSC） DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.09.028 ’ Analysis of the TXT Motifs Effect on the Antifreeze Activity of Antifreeze Protein ApAFP914 from Anatolica polita borealis Using Differential Scanning Calorimetry DU Rong-feng LIU Zhong-yuan MAO Xin-fang （Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering ，College of Life Science and Technology ，Xinjiang University ， Urumqi 830046 ） Abstract: This work is to study the prokaryotic expression and activities of antifreeze protein ApAFP914 and its mutants，and deduce the effects of mutations of TXT motifs on the insect’s antifreeze protein’s activities. By site directed mutagenesis in regular site number of TXT motifs of gene apafp914 in Anatolica polita borealis ，then the mutant gene was cloned into pET32a vector，and expressed in Escherichia coli BL21（DE3）. The fusion protein