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党参多糖磷酸酯化合成工艺均匀设计优化 　　摘要：采用多聚磷酸法对党参[Codonopsis pilosula （Franch.） Nannf.]多糖进行磷酸酯化反应，利用均匀设计试验U8（44）对党参多糖磷酸酯化合成工艺进行优化。采用钼酸铵法测定磷酸根的含量，确定了党参多糖磷酸酯化反应体系的最佳反应条件为温度87 ℃、时间6.3 h、每20 mL多糖溶液加入20 mL多聚磷酸钠溶液pH 10，在此体系下，磷酸根含量为5.26%。 关键词：党参[Codonopsis pilosula （Franch.） Nannf.]多糖；磷酸酯化；均匀设计 中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）16-3936-03 党参为桔梗科植物党参[Codonopsis pilosula（Franch.）Nannf.]的干燥根[1]。党参是常用中药，具多种功效。党参的主要成分有多糖、党参皂苷、甾醇等多种物质。试验研究表明，党参多糖是党参中的有效成分之一[2]。多糖类具有增强机体免疫、抗衰老的作用，在机体中表现出激活免疫细胞通道、激活吞噬细胞活性、增强免疫力、抗肿瘤、抗病毒和清除自由基等作用[3-5]。多糖进一步衍生、接枝、交联等结构改造后，在近年的研究中被用于制作温敏凝胶、pH凝胶，作为新的载药体系或者用于开发新的疫苗[6]。多糖种类很多，然而多糖酯化物种类和数量有限。多糖的磷酸酯化改造方法主要有磷酸和磷酸酐法、磷酸盐法、环三聚磷酸酯法、磷酰氯法等[7]。磷酸酯化修饰后的一些药物以及倍他米松、注射用克林霉素等药物的磷酸酯化物在疗效及用量上得到了很大改善[8]。为了进一步研究多糖磷酸酯化的实际应用，研究多糖磷酸酯化合成途径显得尤为重要，同时由于磷酸酯化物也是一种重要的多糖酯化物，因而对多糖结构进行改性研究，对合成工艺以及后续的药理进行研究有现实的价值和意义。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 原料与试剂 党参购自贵州省遵义市道真县党参种植户，经遵义医学院杨建文教授鉴定为桔梗科植物川党参。党参多糖为自制；透析袋（截留分子质量为3.5 ku），无水乙醇、葡萄糖、浓硫酸、苯酚、无水硫酸钠、盐酸、钼酸铵、维生素C（VC）、三氯乙酸、磷酸氢二钠及多聚磷酸钠等均为分析纯。 1.1.2 仪器与设备 CL-2型恒温磁力搅拌器购自郑州长城科工贸有限公司，L550型低速自动平衡离心机购自长沙湘仪离心机仪器有限公司，R-210型真空旋转蒸发仪购自瑞士Buchi公司，DZF-250型真空干燥箱购自郑州长城科工贸有限公司，U-3100型紫外分光光度计购自日本日立公司，PHS-3CT型精密酸度计购自上海大普仪器有限公司，XMTB型数显水浴锅购自浙江余姚市工业仪表二厂，SX-5-12箱式电阻炉购自北京市永光明医疗仪器厂，AL204分析天平购自瑞士Mettler Toledo公司。 1.2 方法 1.2.1 党参多糖的制备 取80 ℃烘干及粉碎后的党参1 000 g，加入足量的80%乙醇加热回流脱脂3次，向药渣加10倍体积的水煎煮3次，第一次3 h，第二次2 h，第三次1 h；抽滤药渣，合并3次滤液后浓缩。向浓缩液加入95%乙醇到乙醇体积分数为80%，于4 ℃静置12 h后，以3 000 r/min离心，收集沉淀部分，真空干燥后复溶，加95%乙醇到乙醇体积分数为80%后，离心，收集沉淀，冻干，重复此操作3次，至冻干物呈白色后复溶，加入相对于粗多糖质量分数为1%的胃蛋白酶，于室温放置12 h后用Savege法除去蛋白质，然后用截留分子质量为3.5 ku的透析袋处理，得到党参多糖。 1.2.2 党参多糖含量的测定 取烘干至恒重的葡萄糖作为标准物质配制母液，然后用紫外分光光度计做全波长扫描，选择490 nm作为特征吸收波长，采用苯酚-硫酸法在490 nm处对党参多糖含量进行测定[9]。 1.2.3 党参多糖的磷酸酯化反应 在250 mL三口烧瓶中加入20 mL经过预处理的多糖溶液，加入5 mL 5 g/L的Na2SO4溶液，将加好的溶液加热到一定温度后，滴加多聚磷酸钠溶液，加入100 g/L的NaOH溶液调节至溶液呈碱性，在恒定温度下反应，按照试验设计条件进行党参多糖磷酸酯化反应。待多糖磷酸酯化反应完全后，将反应物液体倒入烧杯中，边搅拌边加入3倍体积的无水乙醇，于4 ℃下静置过夜，离心后收集沉淀物，用去离子水复溶后，采用截留分子质量为3.5 ku的透析袋透析72 h，然后收集、浓缩、干燥，得到磷酸酯化多糖待测。 1.2.4 均匀设计试验 在参考多糖结构修饰的基础上[10]，依据多糖磷酸酯化单因素试验结果，选取了温度、时间、投料比（V多糖/V多聚磷酸钠）和pH 4个影响因素