冬虫夏草中各种化学成分检测方法.docVIP

冬虫夏草中各种化学成分检测方法摘 要：阐述近五年来冬虫夏草中核苷类、甘露醇、多种氨基酸等成分的检测方法，其中包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、分光光度法等方法。 关键词：冬虫夏草 化学成分 检测 冬虫夏草具有抗炎、抗肿瘤、降血糖、免疫调节、保护受损肝肾、镇静和抗疲劳等作用，冬虫夏草的化学成分复杂，近五年有关冬虫夏草化学成分测定方法的研究对象主要为核苷类、甘露醇、多种氨基酸、甾醇类及无机元素等。 1 核苷类物质的测定 核苷类物质为冬虫夏草的主要活性成分之一，具有广泛的生理功能，其中以虫草素、腺苷等具有明显的药理作用。近五年的测定方法主要为高效液相色谱法和毛细管电泳法。 1.1 HPLC方法测定 中药成分非常复杂，HPLC因其具有各种分析柱、高选择性和高灵敏度的检测器，所以具备分离效能高、分析速度快、灵敏度高和适用范围广等优点，所以成为中药研究的最重要的分析方法。郑永彪[1]等建立了冷冻保鲜冬虫夏草中尿苷和腺苷的HPLC测定方法。采用Waters sunfire色谱柱（4.6mm×250mm，4.6μm），流动相系统为乙腈和水的比例和体积流量的梯度洗脱程序，柱温35℃，检测波长260nm。结果尿苷和腺苷的线性范围分别为0.0340～0.340μg，0.00494～0.0494μg，平均加样回收率分别为98.70%（RSD为0.48%）、97.39%（RSD为1.6%）。该方法简便快捷、准确精密、重复性好，能用于冷冻保鲜冬虫夏草中腺苷和尿苷的同时测定。周伟平[2]等建立了采用Agilent EclipseXDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱同时测定西藏产冬虫夏草中尿苷及腺苷的含量的方法，检测波长为260nm，以甲醇-水为流动相梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温33℃。尿苷及腺苷的线性范围为32.95～439.3μg/mL（r=0.9999）和3.486～46.48μg/mL（r=0.9999），平均回收率分别为98.5%、95.6%，RSD值分别为1.8%和2.4%（n=6）。来自西藏的23批冬虫夏草中尿苷的含量在1.209～2.192mg/g范围内，腺苷含量在0.0838～0.884mg/g范围内。该法简便、准确，重复性好，可快速测定冬虫夏草中尿苷和腺苷的含量，为控制西藏冬虫夏草的质量提供参考依据。李秀敏[3]等建立了HPLC法测定中药免疫调节方冬虫夏草中腺苷的含量的方法。采用C18色谱柱Hypers LDSC 18mm（4.6mm×250mm，5μm），流动相水-甲醇（85：15），流速1mL/min，检测波长260nm，进样量10μL，柱温25℃。样品预处理方法以在室温下用体积分数50%的甲醇超声波提取60min。结果冬虫夏草中的腺苷质量分数为0.097～0.582mg/mL与峰面积呈良好线性关系。腺苷平均加样回收率为100.88%，RSD%=1.43%。该方法可用于中药免疫调节方冬虫夏草中腺苷的含量测定。梁洪卉[4]等建立了冬虫夏草核苷类物质的微量提取方法，在优化的HPLC-UV色谱条件下，鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等5种冬虫夏草主要核苷类物质的标准品分离完全。精密度、稳定性和回收率实验表明，用HPLC-UV方法即可定量分析冬虫夏草的核苷类有效成分。用该方法检测到这5种核苷类物质含量在冬虫夏草子座部分与其虫体部分之间以及冬虫夏草居群间存在显著差异。结果表明冬虫夏草主要核苷类成分的有效定量分析方法的建立对冬虫夏草的品质评价及质量控制具有重要的现实意义，也为进一步研究影响冬虫夏草品质的因素并建立品质评价体系奠定了基础。 虫草素，即3，-脱氧腺苷（3，-deoxyadenosine）为含氮配糖体的核酸衍生物，属嘌呤类生物碱，是一种核苷类抗生素。虫草素具有抑制微生物生长、抗肿瘤、调节免疫、抗炎等药理作用[5]，宋江峰[6]等建立了测定北冬虫夏草子实体中虫草素的高效液相色谱法。使用Eclipse XDB C18 （4.6mm×150mm，5μm）色谱柱，以水：甲醇：甲酸（95：4：1）为流动相，流速为0.8mL/min，25℃下检测，检测波长为260nm。结果表明虫草素的平均回收率为100.8%，RSD值1.88%，此方法简单、可靠。刘小芳[7]等建立了一种新的反相高效液相色谱方法，用于蛹虫草中腺苷和虫草素的定性定量分析。样品经水超声提取，以终浓度20mmoL/L柠檬酸、40mmoL/L醋酸、20mmoL/L三乙胺的混合溶液-乙腈（体积比98：2）为流动相，流速1.0mL/min，色谱柱Capcellpak C18（150mm×4.6mm，5μm）分离，柱温40℃，进样量10μL，紫外检测波长260nm。在此条件下，腺苷在1～1000μg/mL范围内有良好的线