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2007 年 4 月 ! #$% 第 4 期 （总第 10 1 期） GUANGXI JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY 食 品与生物 产有机磷农药降解酶菌株的筛选及酶学性质研究 罗永侦 ，董桂 清 ，余钧 池 ，谢庆武 (广西大学生命科学与技术学院，广西 甫宁 530004) 【摘 要］ 通过用 乙酞胆碱酯酶抑制法检测有机磷农药 ，从土壤 中分离筛选 出能降解敌敌畏 的 7 个茵株 ，从其 中降解能力 较强的茵株 O PD 7 提取胞 内酶，并进行酶学性质的研究。 结果表 明，该酶分解敌敌畏的最适 pH 为 7.0，最适温度为 42C，pH 稳定 范围为 6- 8，在低于 47C时稳定；该酶也能降解 乙酞 甲胺磷、甲胺磷、乐果和氧化乐果。 【关键词 ］ 敌敌畏 ；有机磷农药降解酶；酶学性质 【中图分类号 ］ @933 【文献标识码 ］ A 【文章编号 ］ 1003- 2673(2007)04 -0025 -02 有机磷农药(Organ OphOsph ates，简称 OP S)具有杀虫效率 次。将富集所得茵液适当稀释，涂布于分离平板，观察是否有茵 高、防治范围广、成本低等特点，在保护农作物免受病虫草害侵 落生长，选择生长旺盛 的茵落进行纯化 。 染 、提高粮食产量等方面发挥 了巨大作用 ，大大促进 了农业生 1.5 敌敌畏降解酶粗酶液的提取 产[1]，但 同时它们也对人类赖 以生存 的环境造成 了严重的污染， 用发酵培养基培养茵体， 离心收集茵体， 用 0.02 mOl / L， 而且经常导致蔬菜和水果等农产 品农药残 留超标，直接危害人 pH7.0 的磷酸缓仲液洗涤后再离心，用适量磷酸缓仲液悬浮所 们 的身体健康[2] 。 因此，当前迫切需要建立一种用于治理环境污 得茵体 ，用 JY92- II 型超声波细胞粉碎机破碎细胞 （工作 电压 染、去除农产品的农药残 留的有效方法 。 目前最有潜力的有效 220V，工作时间 10S，间隔时间 15S，120 个循环），离心所得上 方法之一是生物技术的方法 ：利用能够 降解农药的微生物来治 清液即粗酶液 。 理受农药污染的环境，利用农药降解酶来清除表面农药残 留超 1.6 乙酞胆碱酯酶活性测定 标 的农产 品[3]，其前提是培育 出能高效 降解农药 的茵株和制备 乙酞胆碱酯酶能分解靛酚 乙酸酯(红色)为靛酚(蓝色)和 乙 出高效的农药降解酶。 为了实现用生物学方法来解决农药残 留 酸 ，靛酚 的吸收峰在 605nm，所 以可 以通过吸光度变化值来测 危害的 目标，建立一种快速 、简便、成本低 的筛选农药 降解茵并 定酶活力 。 从中提取降解酶的方法，是当前生物学家首先要解决的重要任 在试 管 中加 入 10!L 乙酞 胆 碱 酯 酶 ，470!L 0.02mOl/L， 务 。本文 舀在探索一种分离筛选能高效降解有机磷农药的微生 pH7.0 磷酸缓仲液，20 !L 2%靛酚 乙酸酯 ，混匀，37C水浴 中反 物 的简单、快捷 的方法，同时对有机磷 降解酶进行初步研究，为 应 5min ，加入 500 !L 95 %乙醇终止反应 ，测 OD605 ，计算酶活 解决农药残 留所造成的危害 问题提供生物学基础 。 力。 !材料与方法 1.7 乙酞胆碱酯酶抑制法检测农药残 留 1.1 土壤 的来源