LC—MS-MS法检查抗风湿骨痛类纯中药制剂中非法添加吡罗昔康.docVIP

LC—MS/MS法检查抗风湿骨痛类纯中药制剂中非法添加吡罗昔康 　　【摘要】 目的 建立HPLC-MS/MS法检查抗风湿骨痛类中药制剂中非法添加吡罗昔康，以打击此类中药制剂及保健食品中非法添加化学药物的现象，净化中药及保健品市场，维护人民群众用药安全有效。方法 采用菲罗门LUNAC18色谱柱，流动相：乙腈-0.6%冰醋酸溶液（60：40）；检测波长：243nm；流速：0.2ml/min选择正离子扫描方式检测常用抗风湿骨痛类中药制剂及保健食品，利用质谱解析软件研究药物的质谱裂解规律，通过比较样品峰与对照品峰的一级和二级质谱质荷比，确定样品中是否掺杂了化学药物。结果LC-MS/MS方法测定上述化学物质的最小检出量为1-50ng。结论 该方法简便、高效、准确性、灵敏度均可满足定性检查的要求。 【关键词】 抗风湿骨痛类中药制剂及保健食品；HPLC-MS/MS法；吡罗昔康 风湿及类风湿性关节炎为常见病，是骨关节的一种慢性、炎症性和破坏性疾病，属于顽固性疾病，患者需要长期服药以控制病情。传统中药在我国有着几千年的历史，并以其疗效彻底、毒副作用小、安全有效深受百姓信赖，因此越来越多的人选用中药来治疗此类疾病。但是中药起效慢，短期疗效还是不如西药明显。所以，社会上有些不法分子之徒为了牟取暴利，以纯中药制剂、保健食品之名非法添加化学药品。吡罗昔康为非甾体抗炎药，具有消炎、镇痛、解热作用，通过抑制前列腺素合成而起作用。但对于消化道溃疡、肾功能不全、心功能不全或高血压、哮喘、凝血机制障碍者有着严重的不良反应。由于无法准确科学控制药量，近而给广大患者造成无法治愈及不良反应的双重伤害。 我们为了遏制这种违法行为，保障人民群众的用药安全，根据现在国家标准对中药制剂和保健品的定性检查效率低的现状，及配合食品药品监督部门研究准确鉴别定性假药方法，作者研究了这种国际公认的液质联用分析方法。本方法灵敏度高，检出限低，重复性好，可为执法检验部门对中药制剂和保健品的检查工作提供可靠的技术支撑。 1 材料 1.1 仪器与试药 安捷伦LC1200高效液相色谱仪，DAD紫外检测器，Chemstation工作站；安捷伦G6300 LC/MSD Trap；MSD Trap Control工作站；赛多利斯电子分析天平BT25S；娃哈哈纯净水；冰醋酸-科密欧分析纯；乙腈-美国进口MREDA 色谱纯；吡罗昔康 批号100177-200603 购于中国药品生物制品检定所，纯度为99.8%；供试样品（均为随机抽取纯中药制剂）：抗风湿骨痛类制剂5批，袪湿骨康胶囊（为展示图谱）。 1.2 实验方法 1.2.1 HPLC条件 色谱柱：采用菲罗门LUNAC18（4.6*150mm5μm）色谱柱；流动相：乙腈-0.6%冰醋酸溶液（60：40）；流速：0.2ml/min；DAD扫描波长范围：190nm-400nm；测定波长243nm；进样量2μl。柱温：25℃。 1.2.2 MS与MS/MS条件 电喷雾正离子检测方式；m/z范围：100-1000；雾化气压力35psi；干燥气流量：10L/min；干燥气温度：310℃；毛细管电压：3500v。 1.3 对照品溶液的配制 精密称取吡罗昔康对照品5mg，用流动相溶解并定容至100ml量瓶中，摇匀，滤过，作为对照品溶液。用于液质联用分析。 1.4 供试品溶液的配制 （因有不法商家将非法添加置于胶囊壳内，以逃避检验检测，故对供试品所用胶囊壳单独提取制备检测。） 内容物：称取不同产品口服一次量，倾出内容物混匀，研细，用流动相50ml定量转移溶解至100ml容量瓶中，超声提取15min，放冷至室温，加入流动相定溶至刻度，混匀，滤过，取续滤液备用。胶囊壳：取上述供试品所用胶囊壳擦净，粉碎，同上述方法制成胶囊壳供试溶液，滤过，续滤液备用。 2 检验结果 2.1 吡罗昔康对照品的色谱及质谱行为 采用正离子检测方式对吡罗昔康对照品溶液进行液质联用分析，保留时间为11.159min，测得准分子离[M+H]+峰m/z332.1，进行MS2，产生的主要碎片离子有m/z121.0、164.0。 2.2 供试品的检测 在与对照品相同的色谱及质谱条件下，将上述制备的10种供试品溶液及胶囊壳溶液进行液质联用分析，供试品溶液的单波长图谱和DAD扫描图谱，与对照品不相同，在MS分析产生准分子离子m/z102、156、256、338、413、469等，与对照品的MS不同。根据以上分析，5批供试品均未检出吡罗昔康。 2.3 重复性及灵敏度 精密量取对照品溶液相同条件连续进样5次，DAD保留时间相对标准偏差均在1%之内，多次进样MS准分子离子及MS2碎片离子质荷比一致，显示此方法重复操作稳定；取对照品溶