chapter9.转基因动物.ppt

转基因动物是指用实验导入的方法将外源基因在染色体基因组内稳定整合并能稳定表达和遗传的一类动物（包括基因敲除的动物）。 4)利用转基因生产重组蛋白 1987年，Simons等在转基因小鼠的乳汁中得到绵羊的β-球蛋白，1988年，该研究小组又从转基因绵羊的乳汁中得到了α-抗胰蛋白酶。 目前，已有多种蛋白实现了转基因生产。 转基因动物实例 转基因动物实例 just a joke 获取外源目的基因 重组载体导入生殖细胞或胚胎干细胞 选择体外培养系统和宿主动物 转基因胚胎的发育及鉴定 筛选所得的转基因动物 病毒载体的不足：诱导机体的免疫反应，存在致毒、致癌的危险、载体容量有限、制备滴度不高等 非病毒载体的优势： 1. 对DNA大小的限制较少，长达48kb的片段已被成功转移至细胞。 2. 没有对包装和复制所必需的病毒序列的要求，DNA易操纵 3. DNA复合物不大可能有感染能力，比较安全。 4. 关于免疫原性，存在问题较少。 逆转录病毒的生活周期 进入宿主细胞 单链RNA 逆转录酶 双链DNA 整合到宿主细胞基因组中（前病毒） 宿主细胞RNA聚合酶 RNA 病毒RNA基因组 作为合成相应 病毒蛋白质的模板（mRNA） 包装成新的病毒颗粒，离开宿主 通常不致死宿主细胞 受精卵雄原核显微注射法 胚胎干细胞（ES细胞）法 逆转录病毒感染法 体细胞核移植法 精子载体法 以单细胞受精卵为靶细胞，利用显微注射技术将构建好的载体DNA直接注射入受精卵的原核，再将接受注射的受精卵移入假孕母体输卵管继续发育获得转基因动物个体。 目前应用较广泛，最早最经典的方法。 用显微注射方法制备转基因动物，操作技术性很强，即使是受过严格训练的专业人员操作，发育成转基因动物的受精卵也只占注射卵的5％。 因此人们往往来用增大微注射受精卵的数目来弥补这一缺陷。 优点： 外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）； 导入过程直观 缺点： 设备昂贵、环节较多 对操作人员有较高的技术要求　 低效率（尤其是大家畜） 对卵伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性 转基因沉默 胚胎干细胞（ES细胞）是早期胚胎的内细胞团经过体外培养建立起来的全能细胞系。 它本身是二倍体，能在体外培养；具有高度的全能性，可以形成包括生殖细胞在内的所有组织，并且在不同的培养条件下表现出不同的功能状态。 将携带有外源基因的ES细胞注入到动物的早期胚胎内，可同宿主的内细胞团共同发育、分化，产生嵌合体转基因动物。 优点： 可预先在细胞水平检测外源基因的拷贝数、定位、表达的水平及插入的稳定性　 外源基因导入ES细胞的方法多样，细胞鉴定及筛选方便 缺点： ES细胞系建立及培养困难 维持ES细胞的未分化及多向分化潜能不易 所得个体为嵌合体　 优点： 外源基因一般单拷贝整合 操作简单，避免注射法对卵子的损害 宿主范围广 优点： 转基因效率显著超过显微注射 可以方便的建立生产畜群 可以预测基因表达水平 优点： 对体细胞进行基因改造后，用于核移植可以提高转基因的效率，不仅具有“ES细胞途径”的全部优点，且物种适用面广。 无需经过嵌合体育种就可获得纯合个体，周期短，效率高。 缺点： 技术上难度大， 成功率极低， 胚胎死亡率高， 非一般实验室可以开展。 将成熟精子与外源ＤＮＡ孵育，精子可捕获外源DNA，并通过受精过程将外源DNA导入受精卵。 此法不仅可免去复杂而昂贵的设备，且可省去不少繁杂的操作和条件准备。但该法有些结果不能重复。 目前国际上只有1例成功模型，国内也很少有相关报道，精子载体法很少被应用。 　1、制作转基因动物效率低 2、外源基因在宿主基因组中的行为难以控制 3、转基因表达水平低 1、制作转基因动物效率低 这是制约这项技术广泛应用的关键。以显微注射法生产转基因动物为例，小鼠、大鼠、兔、牛、猪、绵羊转基因阳性率分别为26%、44%、1