南高丛蓝莓组培再生技术探究.docVIP

南高丛蓝莓组培再生技术探究 　　摘要 南高丛蓝莓品种组培再生技术研究结果表明，外植体以0.1%升汞处理10 min为适宜的灭菌方法，污染率为20.0%，同时萌发的正常芽率也达67.5%；蓝莓芽诱导初代增殖培养以附加ZT 1 mg/L为宜，增殖倍率可达5～6倍，继代培养以ZT 1 mg/L与ZT 2 mg/L交替使用为宜，增殖率可达10～15倍；蓝莓试管苗附加IBA 0.3 mg/L生根效果最佳，有效生根率达55.38%；蓝莓试管苗驯化以苔藓为基质，驯化苗成活率可高达85%以上；蓝莓试管苗瓶外生根的繁殖速率是瓶内生根的1.7～2.6倍。 关键词 南高丛蓝莓；组培再生技术；诱导；驯化；激素；基质 中图分类号 S663.9；Q813.1+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2011）21-0119-02 蓝莓（Blueberry）又名越橘，属杜鹃花科越桔属多年生浆果类灌木。喜土质通气、疏松、有机质含量高、湿润的酸性沙壤土、沙土或草炭土[1-3]。蓝莓常规繁殖的速度较慢，品种容易退化，利用组培快繁技术，既可加快繁殖速度，又能保持品种种性[4-6]，因此本试验对南高丛蓝莓的组培快繁技术进行了研究。 1 材料与方法 1.1 试验材料 供试材料为南高丛蓝莓品种。 1.2 试验方法 1.2.1 不同灭菌剂对灭菌效果的影响试验。设6个处理，分别为：0.1%升汞浸泡5 min（A1）、10 min（A2）、15 min（A3）；5%次氯酸钠浸泡10 min（A4）、20 min（A5）、30 min（A6）。试验以当年生的南高丛蓝莓绿枝枝条作为外植体，流水冲洗2 h后备用。每个处理在升汞浸泡前用75%酒精浸泡30 s，升汞浸泡后用无菌水冲洗5次。 1.2.2 培养条件。以WPM为基本培养基，附加不同激素，蔗糖20 g/L，琼脂粉6.0 g/L，pH值5.2～5.4，培养基在121 ℃、131 kPa的条件下灭菌20 min。培养室温度25 ℃，光照强度2 000～3 000 lx，光周期为16 h光照/8 h黑暗。 1.2.3 不同激素及浓度对蓝莓芽诱导的影响试验。设7个处理，分别为：6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L（B1）；ZT 1 mg/L（B2）、2 mg/L（B3）、3 mg/L（B4）；6-BA 1 mg/L（B5）、2 mg/L（B6）、3 mg/L（B7）。按照各试验设计处理蓝莓茎段，培养45 d后观察正常芽增殖倍数和萌芽外植体数。 1.2.4 不同IBA浓度对试管苗生根诱导的影响试验。设3个处理，分别为：IBA 0.1 mg/L（C1）、0.3 mg/L（C2）、0.5 mg/L（C3）。在1/2 WPM培养基上添加试验设计的不同浓度的IBA，接入试管苗嫩茎的新梢和中段，先遮光培养7 d，后转入光培养28 d后观察根的生长情况。 1.2.5 不同基质处理对试管苗驯化的影响试验。试管苗的驯化选择3种基质：进口泥炭（D1）、泥炭∶黄泥=3∶2（D2）、苔藓（D3），观察试管苗驯化苗生长情况。 1.2.6 组培苗试管外生根试验。由于蓝莓组培试管苗培养时生根慢且生根率低，可采用试管外组培苗生根的方法节约生产成本，以拓展蓝莓试管苗生根途径。在瓶外生根前将继代45 d左右的组培苗移到与驯化相似环境中炼苗7 d左右。扦插前洗净组培苗根部附着的培养基，将组培苗剪成1.5～2.0 cm的茎段，在绿维康系列强力生根A号稀释液中浸5 s后捞出，扦插于苔藓基质苗床上，并立即扣拱棚保湿，20 d后逐渐揭膜通风，40 d后统计生根成活率。 2 结果与分析 2.1 不同灭菌剂对灭菌效果的影响 由表1可知，处理A1、处理A4、处理A5灭菌不充分，污染数超过85%；处理A3、处理A6灭菌过度，尽管污染数少，但已经影响到苗的正常生长；处理A2污染率为20.0%，同时萌发的正常芽率也达67.5%，为适宜的灭菌方法。 2.2 不同激素及浓度对蓝莓芽诱导的影响 由表2、图1可知，处理B2效果较好，培养10 d后在外植体基部产生黄绿色愈伤组织，在节处有丛芽生长，培养30 d后，增殖芽数可达5.86倍，且主枝芽多，丛芽粗壮，利于作为生根苗培养；而处理B3尽管增殖芽倍数高，但侧枝芽偏细，以侧枝芽增殖为主，且基部愈伤块大，为褐色；若以处理B2与处理B3交替使用较为理想，既保证增殖苗的质量，又可达到较大的增殖效果；处理B4产生透明状愈伤组织，易形成玻璃苗；处理B5、处理B6、处理B7培养45 d后观察，外植体生长处于停滞状，既不萌芽生长，也未褐化死亡。 2.3 不同IBA浓度对试管苗生根诱导的影响 由表3可知，IBA可有效地