深圳大学理科选修《生物安全与人类生活》转基因技术介绍.pptVIP

6、胞浆内单精子注射法（ICSI） 精子载体法中精子孵育前的预处理通常使精子的受精能力下降，于是许多学者尝试借鉴医学上的辅助生殖技术ICSI使处理精子受精。 精子胞质内显微受精技术是借助显微操作仪，将一个精子或生精细胞直接注入卵母细胞质内，从而完成受精的过程。它降低了对精子各种指标的要求，使各种在体内外不可能发生正常受精的卵子受精，同时可以避免多精子受精，也为研究异种间受精提供了有效的途径。 1999年美国科学家Perry等首次应用ICSI技术成功地获得了转基因小鼠； 随即研究者们分别在猕猴、猪上进行ICSI转基因尝试，胚胎转基因阳性率也很高，但最终并没有得到出生的转基因动物。 2006年Kurome等把精子与携带有人白蛋白（hALB）基因和绿色荧光蛋白（GFP）基因的 DNA序列片断共孵化，通过 ICSI方法生产的胚胎移植后生产出一头含有hALB和GFP基因的转基因小猪。 * 第四章 转基因技术介绍 一、基本概念 1、转基因技术是 将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中， 导入基因的表达会引起生物体的形状的可遗传的修 饰，这一技术称之为转基因技术。 转基因简称GM，指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。 “遗传工程”、“基因工程”、“遗传转化”均为转基因的近义词。经转基因技术修饰的生物体常称为“遗传修饰生物体” ，简称GMOs。 利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。 2、基因工程 又称分子克隆或重组DNA技术，指用酶学方法，将异源基因与载体DNA载体外进行重组，将形成的重组基因转入细胞，使异源基因在其中复制表达，从而改造生物特性，大量生产人类所需要的产物。 基因工程一般包括4个方面的内容： 获取符合人们要求的DNA片断，即“目的基因”； 将目的基因与质粒或病毒DNA（载体）连接成重组DNA； 把重组DNA引入某种细胞（受体细胞）； 把能表达目的基因的受体细胞挑选出来并使之表达。 表达产物分离纯化 3、转基因技术与传统育种技术的区别 人类自耕种作物以来，就未停止过作物的遗传改良。 过去几千年里农作物改良的方式主要是对自然突变产生的优良基因和重组体的选择和利用，通过随机和自然的方式积累优良基因。 遗传学创立后近百年的动植物育种则是采用人工杂交的方法，进行优良基因的重组和外源基因的导入而实现遗传改良。 转基因技术是利用重组DNA技术将外源基因导入生物体，是对传统技术的发展和补充，两者一脉相承，本质都是对基因的遗传改良。但在基因转移的范围和效率上有所区别： 传统技术一般只能在生物种内个体间实现基因转移，而转基因技术所转移的基因则不受生物间亲缘关系的限制； 传统杂交和选择技术一般是在生物个体水平上进行，操作对象是整个基因组，转移大量的基因，不可能准确地对某个基因进行操作和选择，对后代的表现预见性较差；转基因技术操作和转移的一般是经过明确定义的基因，功能清楚，后代表现可准确预期。 三、植物转基因方法 需要通过组织培养再生植株：农杆菌介导转化法、基因枪介导转化法； 不需要通过组织培养：花粉管通道法 1、农杆菌介导转化法 农杆菌是普遍存在于土壤里的一种革兰氏阴性细菌，在自然条件下可趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。 根瘤农杆菌和发根农杆菌中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA。 农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中，并且可以通过减速分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。 　 Ti Plasmid T-DNA region Left border Right border vir genes ori 农杆菌附着到植物细胞后留在细胞间隙中。T-DNA先在细菌中被剪切、复制，然后转入植物细胞。 auxin 农杆菌——包含Ti质粒 人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。 农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。 1985年，Horsh等首先创立了农杆菌介导的烟草叶盘转化法，拓宽了农杆菌转化法的受体范围； 1993年以来，以农杆菌为载体转化的禾谷类作物已有成功地报道，如水稻、玉米、大麦等。 优点： 转基因多以单拷贝或低拷贝数插入受体细胞 转入的外源基因一般是预期的孟德尔遗传，得到的转基因植株一般是可育的 方法简单、经济、有效 2、基因枪介导转化法 基因枪法最早由Cornell大学的萨Sa