CD80／CD86在Graves病动物模型中的表达及意义.pdfVIP

陕西医学杂志 2014年 1月第 43卷第 1期 7 CD。／CD。在 Graves病动物模型中的表达及意义 华 中科技大学同济医学院附属 同济医院儿科 (武汉) 叶 枫 马晓丹△ 高 雷△ 徐 利△ 侯 鹏△ 吴晓燕△ 伍丽萍△ 施秉银△ 摘 要 目的：探讨 CD ／CD。在动物模型各组织的表达及意义。方法：将 23只 BAIB／c小 鼠分为两组 ，分别注射 Ad—IaCZ(对照组)或促 甲状腺素受体 A亚单位重组腺病毒 (Ad—TSHR )诱 导 甲亢(造模组)。所有小鼠于第2次注射后两周取血、甲状腺 、胸腺、心脏、肝脏和脾脏。放免法测 T ，实时定量 PCR或免疫组化测 CD。／cD。的表达。结果 ：造模组小鼠的甲状腺组织 以及肝脏组 织的 CD 表达明显增高(P0．05)，而 CD8。表达在各组 间无明显差异 (P0．05)。结论 ：CD 可能 参与 了GD的发病机制 ，是 甲亢引起肝脏损伤的潜在危险因素 。 主题词 格 雷夫斯病 ／病理学 免疫 ，细胞 ／代谢 模型 ，动物 小鼠 【中图分类号1 R318．03 【文献标识码】 A doi：10．3969／j．issn．1000—7377．2014．01．002 GD是 B细胞介导 、T细胞依赖 的 自身免疫性疾 开皮肤、肌 肉组织 ，取一侧 甲状腺置于 2ml的无菌、无 病 ，其发病机制主要是针对 TSHR的 自身抗体 TSAbs RNA酶的冻存管 ，放入液氮罐 中保存 ，另一侧 甲状腺 模拟 TSH作用 ，与 TSH受体结合 ，引起 甲状腺肿大 、 置于4 多聚 甲醛 中同定 ，用于组织学观察。打开胸 甲状腺激素释放增加 ，最终引发临床 甲亢。而 甲状腺 腔、腹腔 ，取心脏 、胸腺、脾脏 、肝脏置于 2ml的无菌 、 细胞合成的各种免疫相关因子维持 甲状腺 内的 自身免 无 RNA酶的冻存管 ，放入液氮罐 中保存。 疫过程 ]。CD ／CD 主要表达于活化 的APC细胞 、 3 小 鼠血清 TRAb、TT．测定 以放射免疫法 巨噬细胞和 B细胞 ，与配体 CD。／CTIA一4结合，为 T 进行测定 。 细胞活化提供第 2信号 ；诱导 T细胞 向Th ／Th分 4 甲状腺组织病理学检查 小鼠处死后，分离甲 化 ；参与 B细胞增殖活化的调节 ，在 自身免疫性疾病 状腺 ，4 甲醛 固定 ，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下 的发生发展 中起着重要作用 。本研究主要是通过 观察 。 Graves病动物模型探讨 CD ／CD。在各组织的表达及 5 实时定量 PCR实验 提取总 RNA，逆转录为 可能的意义。 cDNA，取八连管 ，做好标记 ，加入反应体 系 ：蒸馏水 材料与方法 6u1，SYBRGreeflRealtimePCR MasterMix10u1，弓f l 重组腺病毒的构建 经连接 、转化 、筛选得 到 物 2F1(CD 上游引物 ：GGCAAGGCAGCAATACCT— 的重组质粒 pDC316TSHR289，与重组腺病毒骨架质 TA，下 游 引 物 ：CTCTTTGTGCTGCTGATTCG； 粒 pBHGloxdelE13cre共转染 293细胞 ，出现噬斑后 CD 上游 引物：TCT CACGGAAACAGCATCT，下 冻溶细胞 3次 ，收集上清 ，经鉴定正确后接种 293细胞 游 引 物 ：CTTACGGAAGCACCCATGAT)，cDNA 进行大量扩增 。 2l总量 2Ol；反应条件：PCR扩增条件为：预变性 95 2 动物 实验 将 23只 6～8周 龄 SPF级雌 性 ℃ 10S，变性 95℃ 5S，复性 55℃ 15s，延伸 72℃ BAIB／c小 鼠随机