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理化快速检验技术 吉林省疾病预防控制中心 2013.6.6 什么是 酶联免疫分析技术 ELISA的基本原理和方法 ELISA的种类和变化 ELISA的特点 ELISA的应用实例 1971年瑞典学者Engvail和Perlmann, 荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将 免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相 免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA现在已成为目前分析化学领 域中的前沿课题 ，它是一种特殊的试剂分析 方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型 的免疫测定技术 。 一、基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待 测物与酶连接，然后通过酶与底物产生 颜色反应，用于定量测定。测定的对象 可以是抗体也可以是抗原。 在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂） 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体 上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗 原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物 仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相 载体上的抗原（抗体）反应结合后， 再加上酶 的相应底 物，即起 催化水解 或氧化还 原反应而 呈颜色。 其所生成的颜色深浅与 欲测的抗原（抗体）含量成 比例。 这种有色产物可用肉眼、 光学显微镜、电子显微镜观 察，也可以用分光光度计 （酶标仪）加以测定。 其方法简单，方便讯 速，特异性强。 ELISA的种类和变化 （一）双抗体夹心法 （二）间接法 （三）竞争法 （四）双位点一步法 （五）捕获法测IgM抗体 （六）应用亲和素和生物素的ELISA 检测试剂盒：竞争法ELISA Randox beta兴奋剂检测试剂盒原理： 竞争法ELISA • 加入待测样品 样品含有高浓度待检药物残留 样品含有低浓度待检药物残留 • 加入HRP标记的抗体并混匀 样品含有高浓度待检药物残留 样品含有低浓度待检药物残留 • 室温孵育 • 洗板，之后加入底物液并孵育 • 加入终止液 样品含有高浓度待检药物残留 样品含有低浓度待检药物残留 测定管的显色程度则随待测抗原和酶 标抗原与固相抗体竞争结合的结果而 异。如待测抗原量多，竞争性地抑制 酶标抗原与固相抗体结合，使固相上 结合的酶标抗原量减少。因此，加入 底物后显色反应较弱。 ELISA方法所需设备 酶标分析仪 恒温培养箱 恒温摇床 移液枪 涡动仪 离心机 ELISA方法需要注意的一些细节 未使用的微孔板条需立 使用移液槽需仔细标记 即放回铝箔袋中，并密 封保存 ELISA试剂盒使用中的注意事项 避免高温条件下储存与运输试剂盒。 在室温低于20℃或试剂及标本没有回到室温（20-24℃），会导致所有标准的OD 值偏低（非常关键），