植物生长调节剂对槲蕨离体培养效.docVIP

植物生长调节剂对槲蕨离体培养效 　　摘要：以不同来源的槲蕨[Drynaria fortunei （Kunze） J.Sm]孢子、块茎、叶片为试验材料，在培养基中加入不同浓度的6-BA、2，4-D、NAA、IBA等激素，研究植物生长调节剂对槲蕨离体培养的效应。结果表明，适当浓度的2，4-D对槲蕨愈伤组织诱导有良好的促进作用，且愈伤组织较大、嫩绿、质量好，愈伤组织诱导最佳激素组合为1.0 mg/L 6-BA + 1.0 mg/L 2，4-D，诱导率为53.3%；最佳分化培养基为1.0 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L KT，分化率为75.0%；继代增殖中6-BA与NAA配比有较好的效果，最适增殖培养基为2.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，最高增殖倍数可达2.25倍；最佳生根壮苗培养基为1/2 MS+0.5 mg/L NAA+0.3 mg/L IAA。 关键词：植物生长调节剂；槲蕨[Drynaria fortunei （Kunze） J.Sm]；离体培养；效应 中图分类号：S567 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）23-5909-03 槲蕨[Drynaria fortunei （Kunze） J.Sm]为槲蕨科（Drynariaceae）槲蕨属（Drynaria）植物，其根茎是中药骨碎补的主要来源，具有补肾强骨、续伤止痛等功效，常用于治疗肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨折伤、外治斑秃及白癜风[1]等疾病。槲蕨的多糖还具有一定的抗细菌和真菌活性[2]。以槲蕨为原料的强骨胶囊已获国家药品监督管理局颁发的中药二类新药证书和生产批文并开始生产[1]。槲蕨主要分布在长江以南各省，附生于低山丘陵的岩石或树干上。槲蕨分布和数量相对较少，但需求量大，槲蕨占骨碎补商品药材的70%以上[3]。近年来，随着人们保健意识的增强，对原料的需求急剧增加，加上生态环境的变化和骨碎补的大量被采挖，使该植物的种类和数量越来越少，在一些地区骨碎补濒危灭绝，野生槲蕨紧缺。目前，国内外对槲蕨的研究主要集中在化学成分、药理及生药鉴定等方面，有关于消毒方式、光照度等对槲蕨组培快繁的影响的报道[4-6]，而对槲蕨不同部位离体培养的研究报道较少。本试验通过研究植物生长调节剂对槲蕨不同部位外植体离体培养的效应，旨在为槲蕨的组培快繁以及开发利用提供技术参考。 1 材料与方法 1.1 试验材料 供试材料槲蕨孢子、块茎采自广西武鸣县、玉林市及四川等地。2011年4月11日于广西药用植物园离体库进行试验。 1.2 试验方法 1.2.1 外植体的消毒 取槲蕨幼嫩孢子、块茎、叶片，先用洗洁精水溶液清洗块茎表面污垢，清除块茎表皮毛，置于烧杯中流水冲洗15 min，用软毛刷轻轻去除表面尘土，然后移至超净工作台上，用75%乙醇灭菌25～30 s，无菌水冲洗1遍，再用0.1% HgCl2消毒10 min，无菌水浸泡4次，每次5 min。用备用的无菌滤纸吸干外植体表面的水分后，剪切成大小约1.0 cm×0.6 cm、厚为0.2～0.3 cm的块茎，叶片大小为1.0 cm×0.6 cm，平放到培养基上，孢子用消毒好的解剖刀从叶片上刮到培养基中，块茎和叶片每瓶接种2～4个外植体。每处理接种20瓶，3次重复，取平均值。 1.2.2 培养基的选择 愈伤组织诱导及分化培养基是以MS为基本培养基，设不同激素配比共12种，分别为：（0.5、1.0） mg/L 6-BA +（0.5、1.0、1.5）mg/L 2，4-D；（0.5、1.0） mg/L 6-BA+（0.1、0.5、1.0）mg/L KT；继代增殖培养基设不同激素配比10种，分别为：（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5）mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA；2.0 mg/L 6-BA +（0.1、0.5、1.0、1.5、2.0）mg/L NAA；生根培养基以1/2 MS为基本培养基，设不同激素配比4种，分别为：0.5 mg/L IBA、0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L IBA+0.3 mg/L IAA、0.5 mg/L NAA+0.3 mg/L IAA。 1.2.3 培养条件 接种后，在温度20～25 ℃、光照度20～30 μmol/（m2·s）、光照时间12 h/d的条件下进行愈伤组织诱导分化、继代增殖与壮苗生根培养。 2 结果与分析 2.1 不同激素水平对槲蕨愈伤组织诱导的影响 采用12种不同的激素配比对消毒好的槲蕨幼嫩孢子、块茎、叶片进行愈伤组织诱导及分化，首先将外植体接种到愈伤组织诱导培养基中培养（图1A），再对愈伤组织进行分化培养（图1B）。经试验观察发现，孢子培养（图1C）7 d左右