第5章蛋白质工程.ppt

蛋白质工程;具备的知识基础：分子生物学、分子遗传学、 生物化学、微生物学、 细胞学及化工、计算技术等 ;课程的主要任务： 1．掌握蛋白质工程科学的基本原理、基础知 识 2．熟悉蛋白质科学与工程研究的主要方法和技术 3．了解蛋白质工程领域的研究方向与最新科技成果 ;第一节绪论 第二节蛋白质结构基础 第三节蛋白质分子设计 第四节蛋白质的修饰和表达 第五节蛋白质理化性质的分析和鉴定 第六节蛋白质工程的实际应用;第一节 绪论;Protein: G. J. Mulder 在1838年首次提出。蛋白质是细胞原生质的主要组成成分，其与核酸一起共同构成了生命的物质基础 概念：蛋白质是由20种a-氨基酸组成的高分子有机物质,在体内执行多种生理功能 ;一、蛋白质的元素组成 二、蛋白质的分类 三、蛋白质的大小与分子量 四、蛋白质的功能 五、蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次;一、蛋白质的元素组成 ; 6 .25 —16％的倒数，每测定１g 氮相当于6 .25g的蛋白质。也就是1 g 氮所代表的蛋白质量（克数）;一、蛋白质的元素组成 二、蛋白质的分类 三、蛋白质的大小与分子量 四、蛋白质的功能 五、蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次;蛋白质的分类(Classification of proteins);一、蛋白质的元素组成 二、蛋白质的分类 三、蛋白质的大小与分子量 四、蛋白质的功能 五、蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次;蛋白质的大小与分子量;一、蛋白质的元素组成 二、蛋白质的分类 三、蛋白质的大小与分子量 四、蛋白质的功能 五、蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次; 蛋白质的生物功能Proteins have many different biological functions;2).运输和储存功能 Transport and storage;3).机械功能(Mechanical functions);4).运动功能(Movement);5).保护功能(Protection); 6).信息传递功能(Information processing);★ 蛋白质的生物学意义; 1）发现了数千种不同功能和来源的蛋白质 2）其中有上千种蛋白质的氨基酸排列顺序已被测定出来 3）上百种已获得高分辨的分子结构解析图 这些成就,特别是蛋白质结构与功能的特殊联系方面的成就, 为改造蛋白质奠定了关键的基础;绪论;蛋白质工程;主要内容： 1）根据需要合成具有特定氨基酸序列和空间结构的蛋白质 2）确定蛋白质化学组成、空间结构与生物功能之间的关系 基本目的： 1）实现从氨基酸序列预测蛋白质的空间结构和生物功能 2）设计合成具有特定生物功能的全新的蛋白质 ;定义： 以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系为基础，通过有控制的修饰和合成，对现有蛋白质加以定向改造，设计、构建并最终生产出性能比自然界存在的蛋白质更加优良、更加符合人类社会需要的新型蛋白质 ;绪论;蛋白质工程操作流程;1、分离纯化0.1-1.0mg纯蛋白质 2、测定其部分肽段一段结构，根据编码原则合成相应同位素标记的寡苷酸探针 3、以此从基因库中分离编码该蛋白质的克隆化基因，转入噬菌体M13系统，用双脱氧末端终止法进行DNA序列分析 4、通过表达载体获得较大量(0.1-1.0克)该蛋白质用于空间结构测定及结构与功能研究，借助计算机提出分子预测性质及改造方案 5、通过寡核苷酸M13系统定点诱变并分离其突变体，引入表达载体生产并纯化突变性蛋白质，分析其性质指导进一步分子设计，以最终获得所预期性质的分子 ;绪论;1）蛋白质结构分析 2）蛋白质结构预测 3）改造或创造新蛋白质 ;1、蛋白质结构分析（研究核心） 1）收集大量的蛋白质分子结构的信息 2）建立结构与功能之间关系的数据 3）蛋白质结构与功能之间关系的理论研究 三维空间结构的测定是证明新结构改变了原有生物功能的必需手段 ;主要事件： 1934年，胃蛋白酶的x射线衍射照片 J.Bernal, D.Crowfoot 1957年，肌红蛋白晶体结构 Kendrew 1956年，维生素B12晶体结构 D.C.Hodhkin 1959年，血红蛋白晶体结构 Perutz;主要技术： 晶体学技术（x射线晶体结构分析）： 1.对原材料的要求： 具有高度的均一性；影响因素有金属离子、辅酶或一些成键的辅助集团的变化或缺失；蛋白质的酶解、氧化和还原；蛋白质的聚合效应等 2.晶体生长的生化条件：pH值、离子强度、沉淀剂和添加剂的浓度等因素 缺陷：需要分离出足够量的纯蛋白质（几