第二章 仪器分析技术-分光.pptVIP

第二章 仪器分析技术-分光光度法 第二章 仪器分析技术-分光光度法 第二章 仪器分析技术-分光光度法 第二章 仪器分析技术-分光光度法 第二章 仪器分析技术-分光光度法 * 第二章 中药制剂的仪器分析技术 【学习目标】 * 讲授内容 * 分光光度分析技术 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性或定量的分析方法。 波长 紫外光 200～400nm 可见光 400～760nm 某些物质对光有吸收 很多加入显色剂或经过一定的处理，故又可称比色分析使其显色后再测定 对光吸收具有加和性 * 紫外-可见分光光度法 也称为紫外-可见吸收光谱法 波长范围 200～400nm 灵敏度较高 10-4～10-6g/ml 准确度 0.5%，甚至可达0.2% 基本原理:Lamber-Beer定律 A:吸光度 T为透光率 K:吸收系数 C:溶液浓度 L:液层厚度 * 紫外-可见分光光度法 吸收系数 摩尔吸光系数ε λ一定 C=1mol/L L=1cm时的吸光度 百分吸收系数 (比吸收系数) λ一定 C=1g/100ml L=1cm时的吸光度 ε和 关系 * 紫外-可见分光光度法 紫外-可见分光光度计基本结构 光源 可见光源 钨灯或卤钨灯： 350～2500nm 紫外光源 氢灯或氘灯： 160～375nm 200～350nm 吸收池（又称比色皿）：盛放被测溶液的容器 石英吸收池 可见光区 紫外光区 玻璃吸收池 可见光区 * 紫外-可见分光光度法 紫外-可见分光光度计基本结构 检测器 检测器的功能是检测光信号，测量单色光透过被测溶液后光强度变化的一种装置 数据处理系统 放大信号并以适当的方式指示或记录下来 连接计算机 操作控制 数据处理 * 紫外-可见分光光度法 紫外-可见分光光度计的校正和检定 波长 汞灯、氘灯、钬玻璃、高氯酸钬溶液 紫外光区±1nm，500nm附近±2nm 吸光度准确度的校正 重铬酸钾的硫酸溶液 杂散光检查 * 紫外-可见分光光度法 溶剂要求 使用范围均不能小于截止使用波长 甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm 方法 将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度 220～240nm范围内不得超过0.40 241～250nm范围内不得超过0.20 251～300nm范围内不得超过0.10 300nm以上时不得超过0.05。 * 紫外-可见分光光度法 样品溶液的制备—样品前处理 一般都须定量操作 提取 分离 精制 仪器操作（略） * 紫外-可见分光光度法 注意事项 量瓶和移液管：校正、检定，洗净 吸收池：匹配性（透光率相差0.3%以下） 拿位置：磨砂面 装溶液高度：4/5 透光面：要用擦镜纸由上而下擦拭干净 放入样品室：方向应相同 保存：洗净、晾干、防尘 污染 硫酸-发烟硝酸（3:1 V/V）混合溶液稍加浸泡后，洗净 铬酸钾清洁液清洗 * 紫外-可见分光光度法 注意事项 称量：应按《中国药典》规定要求 含量测定：2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份。平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内 鉴别或检查：1份。 稀释转移 次数应尽可能少 转移稀释时所取的容积一般应不少于5ml 吸光度：0.3～0.7之间 测定波长：规定波长±2nm以内 * 第二章 仪器分析技术-分光光度法 第二章 仪器分析技术-分光光度法 第二章 仪器分析技术-分光光度法 第二章 仪器分析技术-分光光度法 第二章 仪器分析技术-分光光度法