第六章 蛋白质工程——自制(修改).ppt

第六章 蛋白质工程;涉及内容 一、蛋白质工程的定义及由来 二、蛋白质的功能及结构基础 三、蛋白质工程的研究方法 四、蛋白质工程的应用实例 五、蛋白质组学; 一、蛋白质工程的定义及由来 1983年，Ulmer在《Science》上发表以“ Protein Engineering ” （蛋白质工程）为题的专论，这标志着人们能按自己的意愿创造出适合人类需求的新基因，并能表达出具有不同功能的蛋白质。蛋白质工程是在基因工程的基础上衍生出来的第二代基因工程。 研究的基本内容和目的： 以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系为基础，通过物理和化学手段对目的基因按预期设计进行修饰和改造，合成新的蛋白质；对现有蛋白质加以定向改造，设计、构建并最终生产出性能比自然界存在的蛋白质更加优良、更加符合人类社会需要的新型蛋白质。;二、蛋白质在生命活动中的重要作用 ; 各种生物功能、生命现象和生理活动主往是通过蛋白质来实现的。;2、蛋白质的基本结构单位——氨基酸 ;氨基酸名称;2）氨基酸的分类; a、两性电离;b、等电点（pI）： 某种溶液中的氨基酸以两性离子形式存在，且所带的 正、负电荷数相等，即净电荷为零时，该溶液的pH值称该 氨基酸的等电点（pI）。 每一种氨基酸都具有特定的等电点（pI），如亮氨酸的 pI为5.98，精氨酸为10.76，赖氨酸为9.74等。这是由于各种 氨基酸分子上所含氨基、羧基等基团以及各种基团的解离 程度不同所致的。 等电点时，氨基酸溶解度最小，容易沉淀，此性质可 用于某种氨基酸的分离纯化。; 当溶液中pH pI 时，该氨基酸带正电；pH pI，带负电。 在同一PH 条件下，各种氨基酸所带的电荷不同。;（二）蛋白质的化学结构和高级结构 ;多肽和多肽链;2、蛋白质的结构 可人为地分成四级结构：一级结构是蛋白质分子的基 本结构，而二、三、四级结构则是其空间结构，又称构象。;由A、B两条肽链组 成，共51个氨基酸， A（21肽）、B（30 肽）两条肽链，A链 内一对S-S，A和B链 间2对S-S;2） 蛋白质的高级结构 ; a、二级结构 ; α-螺旋;α螺旋主要的结构特点; β-折叠; β- 转角;b、超二级结构 ; ??;左手交联;β迂回 ;c、结构域 ; d、三级结构 ;e、四级结构 两条或两条以上具有独立三级结构的多肽链通 过次级键（疏水键、氢键、盐键和范德华力）相连 而形成的一种稳定的构象。 其中每条具有独立三级结构的多肽链称为亚 基。具有四级结构的蛋白质分子中，亚基的种类可 相同或不同；数目从数个到数十个，甚至数百个不 等；亚基之间有特定的空间排布方式。单独的亚基 一般无生物活性，而具有完整四级结构的蛋白质分 子才具有生物活性。; 四级结构也包含蛋白中各亚基的种类、数目及各个亚基在寡聚蛋白中的空间排布和亚基之间的相 互作用。 ;f、蛋白质结构层次总结 ;蛋白质各级结构之间的关系;四、蛋白质分子之间的相互作用; 蛋白质的结构与功能密切相关，既与一级结构有关， 又与空间结构有关。;③ 分子病（一级结构改变引起）; 最早从分子水平证明的 先天性遗传病 —— 镰刀形红细胞贫血症;2）蛋白质的一级结构决定三级结构 ; 核糖核酸酶中有4对 S-S，从理论上说有上百种 不同配对方式，但唯有与 天然核糖核酸酶完全相同 的配对方式，才有酶活 性。这说明：变性了的核 糖核酸酶只要其一级结构 未破坏，就能回复到原来 的三级结构，恢复其生物学功能。;3）蛋白质分子高级结构与功能的关系 血红蛋白与肌红蛋白约在7亿年前开始分化，氨 基酸顺序区别很大但三维结构非常相似，特别是血 红素（与氧气结合功能有关）周围的构象高度相似， 这是它们功能上相似的结构基础，以保证对氧的结合 能力。;六、蛋白质工程;（一）蛋白质工程的研究内容;1、蛋白质结构分析 　　 蛋白质所具有的功能在很大程度上取决于其空 间结构，因此对于蛋白质空间结构的研究在蛋白质 工程中有着极其重要的意义。收集大量的蛋白质分 子结构的信息，以便建立结构与功能之间关系的数据库，为蛋白质结构与功能之间关系的理论研究奠定基础。 X射线衍射法、核磁共振法最常用。目前，在 计算机的辅助下，可有效地分析并直接模拟出蛋白 质的空间结构、蛋白质与辅基和底物结合的情况以 及酶催化的动态机理，对后续研究帮助很大。 ;2、蛋白质结构、功能的设计和预测