LAMP实时浊度法快速检测转基因玉米MON810.pdfVIP

现代食 品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2013，Vo1．29，No．12 LAMP实时浊度法快速检测转基因玉米MON810 王小玉 27邝筱珊 ，胡松楠 ，余以刚’，成晓维 ，冯家望 ，张璜。，肖性龙 (1．华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640)(2．珠海出入境检验检疫局技术中心，广东珠海 519O15)(3．广州迪澳生物科技有限公司，广东广州 510663) 摘要：LAMP实时浊度法是采用环介导等温扩增 (LoopMediatedIsothermalAmplification，LAMP)技术通过实时浊度仪实 时检测反应过程中所产生的白色沉淀，从而实现对扩增全过程的监控，弥补了显色法只能观看反应终点的缺陷，使引物筛选和 反应体系的优化有数据可依。本研究以转基因玉米MON810为研究对象，针对外源基因苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白CrylAr6J与 内源基因边界序列设计 6条特异性引物，通过实时浊度法在63℃的恒温条件下完成检测，对检测的灵敏度、特异性、稳定性进 行了评价。建立了转基因玉米MON810的LAMP实时浊度检测方法，该方法最低检 出限为0．5％，与LAMP显色法和实时荧光 PCR法进行结果比对，符合率为 100％，经评价具有特异性高、稳定性强、准确简便等优点，非常适合转基因玉米MON810的 快速检测，有较好的应用价值。 关键词：环介导等温扩增技术；实时浊度仪；转基因玉米；MON810；检测 文章篇号：1673．9078(2013)12．3002—3005 ARea1．timeThrbidimeter-basedLoopmediatedIsothermalAmplification AssayforRapidDeteeti0n0fGeneticallyM odifiedM a eM ON810 WANG Xiao-yuL2KUANG XiaO．shan，HU Song-nan2YUYi-gang1CHENG Xiao-wei2FENG Jia-wang2 ， , ， ， ， ZHANGHuang~,XIAO Xing-long (1．CollegeofLightIndustryandFoodSciences，SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510640，China) (2．TheInspectionTechnicalCenterofZhuhaiEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Zhuhai519015，China) (3．GuangzhouDIAOBio—technologyCo．Ltd．，Guangzhou510663，China) Abstract：LAMPreal—timeturbiditymethodisbasedontheloop-mediatedisothemr alamplification，detectingawhiteprecil：litate generated duringthereactionby areal-timeturbidimeter,in ordertomonitorthewholeprocessofamplification．Thistechnique overcomesthedefectsofLAMPchromomericmethodwhichcouldonlymonitortheendofreaction，thereforebecomesmorescientific forprimersscreeningandthereactionoptimization．Sixspecificprimersweredesignedforthejunctionsequencesofexogenousgene CrylA andendogenousgeneofgeneticallymodifiedmaizeMON810．Detectionconductedbyreal-timeturbiditymethodat6