MAPK—ERK在牙本质基质蛋白1信号通路中的作用.pdfVIP

中华 口腔医学研究杂志(电子版)2013年 12月第7卷第 6期 ChinJStomatolRes(E1ectronicEdition)，December2013，V01．7，No．6 ． 基 础 研 究 ． MAPK—ERK在牙本质基质蛋 白 信号通路中的作用 伍虹 庄沛林 余艳崧 陈绛媛 SfeirCharles 黄洪章 【摘要】 目的 探讨在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、小鼠前成骨细胞(MC3T3)和成牙本质细 胞(MDPC一23)中，牙本质基质蛋 白1(DMP1)是否通过激活丝裂原活化蛋 白激酶 (MAPK)一细胞外调 节蛋白激酶(ERK)信号通路发挥作用。方法 Weste133blot检测不同时间点rDMPIC和rDMP1F蛋 白处理 hMSC、MC3T3一E1和 MDPC23后 ，对 MAPK—ERK的激活情况 ；并检测使用 MAPK抑制剂 后．ERK的激活是否被抑制：细胞免疫荧光技术观察MAPK抑制剂抑制激活的ERK从胞浆向胞核 的转位情况 Westernblot检测 siRNA沉默Ras基因后 ，对rDMP1引起 MAPK—ERK信号通路激活 的影响。结果 三种细胞中．rDMP1F和rDMP1C在 5min～3h均可以激活 MAPK．ERK通路 。而总 ERK在各时间点均无显著变化 ：rDMP1F激活信号通路的持续时间均明显长于 rDMP1C：MAPK抑 制剂处理组的p—ERK条带与 rDMP1F／C处理组的p。ERK条带差别明显。hMSC中，rDMP1F激活 MAPK信号通路持续时间要长于其在 MC3T3和 MDPC一23中的作用 细胞免疫荧光检测发现， MAPK抑制剂组可以阻断ERK向细胞核内的转位 MC3T3和MDPC一23在 siRNA沉默 Ras基因后 ． ERK的磷酸化水平与rDMP1F单独处理组相比显著降低。结论 rDMP1C和rDMP1F都通过Ras激 活MAPKERK信号通路 ．而rDMP1F比rDMPIC具有更强的信号功能。 【关键词】牙本质基质蛋白1； 丝裂原活化蛋 白激酶； 细胞外调节蛋白激酶 ；信号通路 DMP1 Ssignalpathway viaM APK-ERK f／Hong ，ZH ⅣG 心Z ，y Yon—song，CHEN Jiang-yuan。SfeirCharles，HUANGHong-zhang．4DepartmentofStomatology，SunYat—senMemorial Hospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510120，China Correspondingauthor：川 ⅣG Hong-zhang，Email：huanghongzhang@tom．con， 2：020一韶 82D 2J A【bstract】 Objective Dentinmatrixphosphoprotein1 (DMP1)isanon—collagenous，acidic extracellularmatrix protein expressed chiefly in bone and dentin．The presentstudy was aimed to investigatewhetherDMP1can triggerMAPK signallingpathway in hMSC．MC3T3一E1and MDPC一23 cells．M ehtods TheactivationofMAPK．ERK bvrDMPIF／CandinhibitionofERK bvMAPK inhibitor atdifferenttimepointsinhMSC．MC3T3一E1and MDPC一23 cellswasdetectedusingW estern blot．The inhibition of ERK cytoplasm／nucleus translocation by the MAPK inhibitor was detected using immunofluorescencemicroscopy．I eactivationofMAPK—ERK signallingpathwaybyDMP1wasfurther validated through knowdown ofRas gene expression by siRNA．Results TheMAPK．ERK