MRC-5、Vero、Hep-2及RD细胞对柯萨奇A16病毒的敏感性比较.pdfVIP

山东医药2013年第 53卷第48期 MRC一5、Vero、Hep一2及 RD细胞对柯萨奇 A16病毒的敏感性 比较 杨海玉 ，查 杰 ，马智龙 (泰州市疾病预防控制 中心，江苏泰州1225300) 摘要 ：目的 比较 MRC-5、Vero、Hep-2及 RD细胞对柯萨奇 A16(CoxA16)病毒的敏感性。方法 将 3株 Cox— A16病毒毒株用病毒生长液分别作 1O倍稀释，共 10一一10 8个稀释度，每个稀释度取0．1mL分别接种于长满单 层MRC．5、Vero、Hep-2及RD细胞的96孔细胞培养板中，每个稀释度接种 10孔，另设 16孔只接种稀释液作为空白 对照。培养 120h，每 12h观察接种后各细胞病变(CPE)情况，直到对照细胞老化脱落为止；按 Reed—Muench法计 算各细胞培养96、108、120h的50％组织培养感染剂量 (TCID50)。结果 RD和Vero细胞 CPE出现时间为36h， Hep．2和MRC-5细胞为72h。MRC一5细胞培养96、108、120h后的TCID50分别为0、0、1．23，Vero细胞分别为5．45、 6．87、7．20，Hep一2细胞分别为 0、0、2．11，RD细胞分别为 2．61、2．61、2．61。结论 4种细胞对 CoxA16病毒的敏感 性由高到低依次为Vero、RD、Hep一2、MRC-5。 关键词 ：ebJk传染病；柯萨奇A16病毒 ；50％组织培养感染剂量；细胞培养；敏感性 doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2013．48．010 中图分类号 ：R725．1 文献标志码：A 文章编号：1002—266X(2013)48-0027—02 手足 口病是 5岁以下儿童 中发生的常见传染 TA一胰酶等为 Gibco产 品，其他试剂均为 国产分 病 ，但 目前 尚无针对手足 口病的预防性疫苗或治疗 析纯 。 性药物。柯萨奇 A16(CoxA16)病毒是引起儿童手 1．2 方法 足 口病 的重要病原体，其地方株的分离是对本病进 1．2．1 细胞传代培养 MRC-5、Vero、Hep．2及 RD 行诊断和防治的基础 ，可 以为我 国对 CoxA16的研 细胞分别培养于含有 10％胎牛血清的DMEM培养 究、毒株的鉴定提供参考和依据 j。细胞培养是分 液中，37℃、5％CO 、饱和湿度传代，分数个T25细 离病毒的传统可靠方法，50％组织培养感染剂量法 胞瓶。待细胞长成单片 80％以上时，换培养液 1 (TCID50法)指能在半数细胞培养板孔或试管 内引 次，总体积为6mL。 起细胞病变 (CPE)的病毒量，已被用于测定许多种 1．2．2 敏感性检测 上述 4种细胞经消化液消化 病毒的滴度，与其他传统方法相 比，具有速度较快、 后，800r／min离心 3min，加 10mL培养液重新悬 结果可重复、更稳定的优点，且能间接反映病毒的感 浮，吹打均匀，用排枪吸 100 L加入 96孔培养板， 染力。2012年 9～12月，本研究通过观察 MRC-5、 每加 1次，剩下的细胞液要重新吹打均匀。细胞加 Vero、Hep-2及 RD细胞在相 同条件下感染 CoxA16 完后，上下左右混合均匀，置于37oC、5％CO 、饱和 后的TCID50，比较其对 CoxA16的敏感性。现报告 湿度培养箱 中培养 12h。弃去培养液，用 D．hanks 如下 。 液清洗 2遍。将 3株 CoxA16病毒毒株用病毒生长 1 材料与方法 液分别作 10倍系列稀释，取 l0～、10～、10～、10～、 1．1 材料 Vero、MRC-5细胞 由中科院上海细胞库 10～、10～、l0一、10 共8个稀释度，每个稀释度取 提供，RD、Hep-2细胞 由江苏省疾控中心流感室提 0．1mL分别接种于长满单层的MRC．5、Vero、Hep．2 供，均 由本实验室稳定传代后保存。CoxA16病毒为