NDV江苏分离株F基因的克隆与序列分析.pdfVIP

NDV江苏分离株F基因的克隆与序列分析 王善辉 ，谢金文 ，王文秀 ，成子强 (1．江苏省徐州生物工程职业技学院，江苏徐州；2．山东省农业大学动物医学院，山东泰安； 3．山东省滨州畜牧兽医研究院重点实验室，山东滨州256600) 摘 要：为比较NDV江苏分离株的遗传变异特征，应用RT-PCR扩增出新城疫病毒 (NDV)江苏徐州株 (JSXZ)、 江苏宿州株 (JSSZ)、江苏连云港株 (JSLYG)和江苏淮安株 (JsHA)的融合蛋白F基因的全长核苷酸，将其 分别克隆至pMD18．T载体 中。将获得的阳性重组质粒进行序列测定后，推导出其氨基酸序列，进行分析和比较。 结果表明，所获得的4个分离株F基 因完整的开放 阅读框长度为 1662bp，共编码F蛋白的553个氨基酸；4个 毒株与常用疫苗株之间核苷酸序列同源性只有69．3％～80．8％。JSXZ株和JSSZ株F基因的裂解位点为 “一RRQK／ RRF一“，符合强毒株裂解区氨基酸组成的特征。以lbp～374bp的核苷酸序列绘制系统发育树分析表明，JSXZ和 JSSZ株NDV为基因Vm型，JSLYG和 JSHA株NDV为基 因Ⅸ型。 关键词：NDV；F基因：克隆；序列分析 中图分类号：$852．652，5 文献标识码：A 文章编号：1005．944X (2014)03—0064—04 CloningandSequenceAnalysisofFusionGeneofNDVJiangsuIsolates WangShanhui，XieJinwen，WangW enxiu，ChiXinafeng， GaoSanyang，ShenZhiqiang (1．JiangsuXuzhouVocationalCollegeofBioengineering，Xuzhou，Jiangsu221006；2．CollegeofVeterinary Medicine，ShandongAgriculturalUniversity，Tai’na ，Shandong271018；3．Shna dongBinzhou AnimalScience Veterinary MedicineInstitute，Binzhou，Shandong256600) Abstract：Inordertounderstna dthefeaturesofhereditary vad~ionofNDV isolatesfrom Jiangsu，thefusionglyco— protein (F)genesofNDV Xuzhou (JSXZ)，Suzhou (JSSZ)，Lianyungang (JSLYG)andHuaian (JSHA) isolateswereamplifiedbyreversetranscriptasepolymerasechainreaction (RT-PCR)nadclonedintopMD 18-Tvector． Therecombinantplasmidsweresequenced．TheireDNA wereobtainedandtheiraminoacidsequenceswerededuced， na alyzedandcompared．TheresultsshowedthatcompleteopenreadrfameofFgeneofthe4isolateswere1662bpand encoded553ma inoacids．Thenucleotidesequencehomologiesma ongthe4isolatesnadNDV vaccinestrainwere69．3％ 一 80．8％．ThededucedamidacidsequenceofthecleavagesiteregionofJSXZnadJSSZFproteinwas“-RRQK／RRF一“． conformingtohtefeautreofvelogenicstrain．PolygenetictreeofNDV srtainswereconstructedbynueleotideacidse— quenceso