专题― 微生物培养技术.pptVIP

专题一 微生物培养技术 菌落 1、概念： 单个或少数微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 选择培养基 （三）接种技术 二、测定微生物的数量 三、培养基对微生物的选择作用 2、稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落,即为纯培养物。 系列稀释操作 70%的酒精 涂布平板操作步骤 取菌液滴加到培养基表面 1、微生物实验室培养的基本操作程序 （1）器具的灭菌 （2）培养基的配制 （3）培养基的灭菌 （4）倒平板 （5）微生物接种 （6）恒温箱中培养 （7）菌种的保存 （四）案例：大肠杆菌的分离和纯培养 （1）制备牛肉膏蛋白胨培养基 2、大肠杆菌的分离和纯培养步骤 （2)配制培养基：计算称量；熔化； 调PH；分装； 灭菌； 倒平板 （3）接种：平板划线法；稀释涂布平板法。 （4）培养： 倒置，37℃恒温箱，12和24h。 （5）纯化培养：倒置，37℃恒温箱，24h。 （6）菌种保藏：临时、长期保存法。 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 -20 ℃冷冻箱保存 （一）测定微生物数量的方法 1.直接计数法 最常用：显微镜直接计数法 （方法、优点、缺点、适用条件） 一、基础知识 2、间接计数法： 最常用的是稀释平板计数法 稀释平板法 稀释涂布平板法 稀释混合平板法 * * 微生物 非细胞生物：病毒 原核生物：细菌、放线菌、支原体、 立克次氏体 真核生物：真菌（酵母菌、霉菌） 2、菌落是鉴定微生物的重要依据： 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等。 细菌菌落 细菌的菌落特征因种而异 如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构 真菌：酵母菌和霉菌 青霉 一、微生物的分离和纯培养 （3项技术1个案例） （一）培养基配制技术 （二）无菌技术 （三）接种技术 案例：大肠杆菌的分离和纯培养 （一）无菌技术 1、概念：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒； ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌； ④实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行—— 酒精灯的火焰旁的局部高温使微生物难以生存 2、消毒 　（1）定义：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不 包括芽孢和孢子）　 A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min，日常生活常用 B、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮15min，适用于不耐高温的液体，如牛奶。 C、化学药剂消毒法:用酒精进行皮肤消毒; 氯气消毒水源 D、射线消毒法，如紫外线 （2）消毒的方法： （1）定义：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 。 2、灭菌 （2）灭菌的方法： A、灼烧灭菌 方法：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层(温度最高)灼烧(迅速彻底) 适用范围：接种环、接种针、金属用具(接种工具)；试管口或瓶口(在接种过程中易被污染的部位) C、湿热灭菌 方法：高压蒸汽灭菌P8 适用于培养基的灭菌 B、干热灭菌： 方法：干热灭菌箱, 160-170 ℃下加热1-2h。 适用范围：吸管、培养皿(玻璃器皿)、金属用具(能耐高温的、需保持干燥的物品) 1、培养基定义：（课本第9页） 2、营养构成： 环境条件：pH、氧气、二氧化碳、渗透压等 （二）培养基配制技术 基本营养成分：水、无机盐、碳源、氮源等 特殊营养成分：维生素、生长因子等特殊的、能满足微生物不同需要的营养物质。 固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等 半固体培养基可观察微生物的运动 液体培养基常用于发酵工业。 （1）按物理状态分： 固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 3.培养基的分类 固体培养基 平板培养基（课本第9页） 斜面培养基 固体培养基中需加入凝固剂，如琼脂 半固体培养基 无运动 有运动 半固体培养基中也需要加入凝固剂琼脂，但加入