共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达ifnβ-hsa融合蛋白质的影响 effect of co-expression of protein folding factor on expression of fusion protein ifnβ-hsa in pichia pastoris.pdfVIP

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2017-11-22 发布于上海
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共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达ifnβ-hsa融合蛋白质的影响 effect of co-expression of protein folding factor on expression of fusion protein ifnβ-hsa in pichia pastoris.pdf

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共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达ifnβ-hsa融合蛋白质的影响 effect of co-expression of protein folding factor on expression of fusion protein ifnβ-hsa in pichia pastoris

共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达 IFNp—HSA融合蛋白质的影响陈凤祥1，关波1，陈蕴2，段作营1，金坚2，李华钟81 (1．江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122；2．江南大学药学院．江苏无锡214122) zeocin的YPD平板筛选阳性转化子，并采用PCR和Westemblot法进一步鉴定。阳性转化子进行摇瓶发酵后，采用SDS—PAGE及Westem 达水平的影响。结果表明，Er01、PDI和BiP成功地在胞内过量表达，且不影响宿主细胞的正常生 IF‘NB—HSA的表达水平无明显影响。关键字：蛋白质折叠辅助因子；融合蛋白质IFNB—HSA；毕赤酵母；内质网氧化还原酶；二硫键异构酶；分子伴侣BiP 中图分类号：Q786文献标志码：A 文章编号：1673—1689(2014)12—1246—05 Effectof ofProtein Factor on ofFusion Co—ExpressionFolding Expression Protein in IFND—HSAAk庇施p以s幻廊 GUAN CHEN Bo、， Y稿，DUAN JINJt矗．LI CHENn黟泌n窖， zuoytn窖， Htmzhon窖1 ofIndus伍al of (1．KeyIJaborafory Biotechnology，MinistryEducation，JiangnanUniversify，Wuxi214122，China 2．Sch001ofPha珊aceutical 2141 22，China) Science，JiangnanUniversity，Wuxi the levelof of factorsEro BiPon Abstract：To and exploreexpressionco—expressionfolding l，PDI of 15．The pmductionIFNp—HSAby只c^inp(醛￡or括GSl andthe B linearizedand into (contr01)were expressionplasmids emptyplasmidpGAPZ integrated the of GS11 recombinantwere genomePp傩￡or妇 5一IFNB—HSAbyelectroporation．Theveasts screenedwith400 zeocin．Positiverecombinantswereidentmed PCRand ¨g／mL bvgenomic Westernblot．Thetransfb硼antswerefbrmentedinnaskandthe wereconfinned