易错pcr技术提高中性内切葡聚糖酶活性 improving endoglucanase activity from bacillus subtilis by error-prone pcr.pdfVIP

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2017-11-19 发布于上海
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易错pcr技术提高中性内切葡聚糖酶活性 improving endoglucanase activity from bacillus subtilis by error-prone pcr.pdf

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易错pcr技术提高中性内切葡聚糖酶活性 improving endoglucanase activity from bacillus subtilis by error-prone pcr

易错PCR技术提高中性内切葡聚糖酶活性唐自钟，刘姗，韩学易，姚友旭，刘默洋，陈惠4，晋海军，吴琦，单志 (四川农业大学生命科学与理学院，四川雅安625014) 摘要：近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景，而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低。成本高的限制。为了提高中性内切葡聚糖酶的活性，作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌(Bacillussubtil括)C一36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究，构建了在大肠杆菌中的突变体库。通过刚果红平板筛选，获得了酶活性提高的突变株F一10，活力比亲本酶提高 PAGE条带．表明基因表达正确，而表达量较原始菌株显著增加。酶学性质分析，表明该酶的最适 4．5～10．0范围内50oC保温30min可保持80％的反应pH为5．6，最适反应温度为45℃，在pH 剩余酶活，在60～75℃酶活力相对稳定，可保持在最高酶活的80％以上，-3温度高于75℃时，酶开始变性失活，酶活力迅速下降。研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶茵株，为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础，也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。关键词：枯草芽胞杆菌；内切葡聚糖酶；易错PCR；酶学性质 815文献标志码：A 中图分类号：Q 文章编号：1673—1689(2013)07—0754—08 fromBacillussubtilisError--PronePCR EndoglucanaseActivity by Improving TA N YA0 NG You—XU，LIU Shah，HAXue-yi， Mo—yang， Zi-zhong，LIU CHEN Zi Hui+，JIN Hai-jUn，形UQi，SHAN of andScience，Sichuan 625014，China) Biology AgnculturalUniversity，Ya7an (College with and totranslate p-1，4一glucosidase Abstract：Endoglucanasecooperatescellobihydrolase foundthatlow and celluloseto lotsofresearchers enzymaticactivityhigh glucosecompletely．Now